[發(fā)明專利]一種人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的免疫測定方法及其系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811401320.2
• 申請日: 2016-11-22
• 公開（公告）號: CN109470873B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊陽;趙衛(wèi)國;張向輝
• 申請（專利權(quán)）人: 科美博陽診斷技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/58;G01N21/76
• 代理公司: 北京聿宏知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 劉建軍;吳大建

本發(fā)明涉及光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)領(lǐng)域的一種人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的免疫測定方法、一種用于鑒定人絨毛膜促性腺激素及β亞單位免疫測定的系統(tǒng)和一種檢測人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的試劑盒；以及另一種人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的免疫測定方法、另一種用于鑒定人絨毛膜促性腺激素及β亞單位免疫測定的系統(tǒng)和另一種檢測人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的試劑盒。

本申請是申請日為2016年11月22日，申請?zhí)枮?01611026623.1，發(fā)明名稱為“免疫測定方法、用于鑒定免疫測定的系統(tǒng)和試劑盒”的中國專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的免疫測定方法、一種用于鑒定人絨毛膜促性腺激素及β亞單位免疫測定的系統(tǒng)和一種檢測人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的試劑盒；以及另一種人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的免疫測定方法、另一種用于鑒定人絨毛膜促性腺激素及β亞單位免疫測定的系統(tǒng)和另一種檢測人絨毛膜促性腺激素及β亞單位的試劑盒。

背景技術(shù)

免疫學(xué)檢測是基于抗原抗體特異性反應(yīng)的原理進(jìn)行的，由于其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對被測物進(jìn)行顯示或信號的放大，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量生物活性物質(zhì)。

化學(xué)發(fā)光免疫分析則是近年來發(fā)展較迅速的非放射性免疫檢測技術(shù)，其原理是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)進(jìn)行信號的放大，并借助其發(fā)光強(qiáng)度，對免疫結(jié)合過程進(jìn)行直接測定，該法已成為免疫學(xué)檢測的重要方向之一。

光激化學(xué)發(fā)光法是化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)的常用方法之一，可用于研究生物分子間的相互作用，臨床上主要用于疾病的檢測。該技術(shù)整合了高分子微粒技術(shù)、有機(jī)合成、蛋白質(zhì)化學(xué)及臨床檢測等相關(guān)領(lǐng)域的研究。它通過感光微粒和發(fā)光微粒在一定范圍內(nèi)結(jié)合，產(chǎn)生離子氧能量的傳遞，發(fā)出光信號，從而對待測樣本進(jìn)行檢測。其中，感光微粒內(nèi)部填充有感光化合物，而發(fā)光微粒內(nèi)部填充有發(fā)光化合物和鑭系元素。在紅色激光(600～700nm)的激發(fā)下，感光微粒釋放出高能態(tài)的單線態(tài)氧離子(4μS)，其傳播距離約為200nm。當(dāng)感光微粒和發(fā)光微粒的距離足夠接近時，感光微粒釋放的單線態(tài)氧離子能到達(dá)發(fā)光微粒，并通過一系列的化學(xué)反應(yīng)，發(fā)射出520～620nm高能級的光，而被儀器檢測到。在本反應(yīng)體系中，微粒的濃度很低，碰撞幾率較小，本底信號微弱。只有在感光微粒和發(fā)光微粒通過免疫反應(yīng)結(jié)合以后，才會發(fā)射出明顯的光，因此系統(tǒng)的靈敏度很高。在疾病診斷中，常用的檢測模式包含三到四個組分：包被抗原或抗體的發(fā)光微粒、生物素或地高辛標(biāo)記的抗原或抗體、親和素或抗地高辛包被的感光微粒，中和抗原或抗體等。以上各組份通過兩步以上溫育反應(yīng)與待測抗原或抗體結(jié)合，并通過化學(xué)發(fā)光量的強(qiáng)弱對待測樣本進(jìn)行定性或定量檢測。與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫分析方法相比，它具有均相、靈敏度高和操作簡便易于自動化等特點。因此，其應(yīng)用前景十分廣闊。

對于雙抗夾心的檢測模式中，當(dāng)待檢測物質(zhì)濃度高到一定濃度時，會因為不能形成雙抗夾心復(fù)合物從而信號值偏低的現(xiàn)象，稱為高劑量-鉤狀效應(yīng) (HD-HOOK效應(yīng))。也就是說，高劑量-鉤狀效應(yīng)是指在雙位點夾心免疫實驗中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量區(qū)段，線性走向不是呈平臺狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子，導(dǎo)致產(chǎn)生假陰性的現(xiàn)象。

HD-HOOK效應(yīng)在免疫檢測中經(jīng)常發(fā)生，其發(fā)生率占陽性樣本30％左右。由于HD-HOOK效應(yīng)的存在導(dǎo)致被檢測樣本不能被正確區(qū)分為是由于其濃度超出檢測試劑盒的線性范圍還是本身濃度就是該值，以至于實驗誤診，尤其是導(dǎo)致假陰性率上升。

具體來說，一方面，在檢測高濃度的樣本時，高劑量-鉤狀效應(yīng)可能導(dǎo)致檢測信號偏低，樣本也因此被判讀為偏低濃度。既往的解決辦法是增加試劑的組分，對待測樣本進(jìn)行稀釋或進(jìn)行兩步法檢測等。

另一方面，因為高劑量-鉤狀效應(yīng)，當(dāng)樣本濃度的升高到一定值時，信號并不能持續(xù)升高，限制了檢測范圍。既往主要通過優(yōu)化抗體或提高抗體來拓寬檢測范圍。

常規(guī)檢測流程有以下5個步驟：反應(yīng)孔中加入待測物及試劑、第一步溫育、添加通用液、第二步溫育和讀數(shù)。