[發明專利]半連續發酵工藝生產吡咯喹啉醌的方法

有效

• 申請號: 201811399198.X
• 申請日: 2018-11-22
• 公開（公告）號: CN109628509B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 趙子剛;張葵
• 申請（專利權）人: 北大方正集團有限公司;北大醫藥重慶大新藥業股份有限公司;北大醫療產業集團有限公司
• 主分類號: C12P7/66
• 分類號: C12P7/66;C12R1/01
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.半連續發酵工藝生產吡咯喹啉醌的方法，其特征在于，以生絲微菌（Hyphomicrobium sp.）DSM1869作為發酵菌種，采用半連續發酵工藝生產吡咯喹啉醌；所述方法包括以下步驟：

A、采用補料發酵的方法，待發酵液OD₆₀₀=35-45，進行部分放料和補充新鮮發酵培養基，將發酵液稀釋至OD₆₀₀=25-30，繼續發酵；

B、待發酵液OD₆₀₀=35-45，按照步驟A的方法進行放料和補充新鮮發酵培養基，然后繼續發酵；

C、重復步驟B 2-15次，結束發酵；

步驟A中放料的體積為發酵液總體積的25-30%；

步驟A補料發酵的具體方法為：

A1、制備種子液；

A2、將步驟A1制備的種子液接入發酵培養基中，進行發酵培養，發酵全程用流加的方式補料甲醇，發酵液中甲醇濃度控制在0.1-1.0g/L；

步驟A1包括將活化后的斜面菌種接種至種子培養基內進行培養，培養溫度為29-31℃，通氣攪拌培養至OD₆₀₀=0.8-1.0，作為種子液；

步驟A1中所述種子培養基的配方為：(NH₄)₂SO₄ 3.0g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 3.0g/L，KH₂PO₄1.4g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，CaCl₂·2H₂O 21mg/L，ZnSO₄·7H₂O 15.75mg/L，FeSO₄·7H₂O5.25mg/L，MnSO₄·4H₂O 3.15mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.525mg/L，NaCl 1.05mg/L，(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 21μg/L，KI 21μg/L，CoCl₂·6H₂O 21μg/L，H₃BO₃ 21μg/L，甲醇10ml/L；

步驟A2中所用發酵培養基配方為：(NH₄)₂SO₄ 3.0g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 3.0g/L，KH₂PO₄1.4g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，CaCl₂·2H₂O 21mg/L，ZnSO₄·7H₂O 15.75mg/L，FeSO₄·7H₂O5.25mg/L，MnSO₄·4H₂O 3.15mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.525mg/L，NaCl 1.05mg/L，(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 21μg/L，KI 21μg/L，CoCl₂·6H₂O 21μg/L，H₃BO₃ 21μg/L；

步驟A2中種子液的接種量為5-10%，發酵培養條件為：29-31℃，轉速100-600rpm，通氣量0.5-1.0vvm，DO≥30%；通過補氨水控制發酵液的pH值為6.8-7.0。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟C為重復步驟B 8-10次。