[發明專利]條紋斑竹鯊免疫球蛋白新抗原受體可變區庫引物及應用

有效

• 申請號: 201811381143.6
• 申請日: 2018-11-20
• 公開（公告）號: CN111197074B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 楊乃波;項海濤;劉楚新;王媚娘;危立坤;史家海
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院;香港城市大學深圳研究院
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了條紋斑竹鯊免疫球蛋白新抗原受體可變區庫引物及應用。本發明提供了成套引物，其包括引物組甲和引物組乙；所述引物組甲包括50條引物中的至少一條；所述50條引物分別為序列13所示的單鏈DNA分子或其衍生物至序列62所示的單鏈DNA分子或其衍生物；所述引物組乙包括42條引物中的至少一條；所述42條引物分別為序列63所示的單鏈DNA分子或其衍生物至序列104所示的單鏈DNA分子或其衍生物。本發明在條紋斑竹鯊的基因組上，發現了共4個IgNAR基因簇，并且通過本發明中的引物，能夠擴增出全部基因簇所對應的vNAR序列。所以認為本發明中的引物能夠擴增出完整的vNAR庫序列。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種條紋斑竹鯊免疫球蛋白新抗原受體可變區庫引物及應用。

背景技術

抗體可分為雙鏈抗體與單鏈抗體。雙鏈抗體,也稱為傳統抗體(VH)，它的單體是由四條肽鏈形成的對稱結構，主要包括兩條輕鏈和兩條重鏈，重鏈和輕鏈之間由二硫鍵連接。雙鏈抗體由于分子大、結構復雜、價格昂貴限制了它們的生產及在臨床應用上的推廣。

相對于傳統抗體，在駝科動物和軟骨魚類中存在著天然的缺失輕鏈的純重鏈抗體，其可變區被稱為“納米抗體”，具有分子量小、毒性低、組織滲透性強、溶解性好、易改造與表達的特點，它們能克服傳統抗體的不足，并有望治療更多的疾病，并大大降低抗體藥物的生產成本。

鯊魚和駱駝是兩種能夠產生純重鏈抗體的物種，鯊魚產生的重鏈抗體被稱為免疫球蛋白新抗原受體(Ig?new?antigen?receptor,IgNAR)，IgNAR是同型二聚體，其中每條鏈由五個恒定結構域，以及與抗原結合的可變結構域(vNAR)組成。由于鯊魚抗體產生于高滲透壓(約5倍于正常動物)和高蛋白變性(350mM的尿素)的環境中，因此比駝科抗體具有更高的穩定性。鯊魚抗體的熱穩定性在85攝氏度以上。并且，抗體領域的相關專利基本上都已經掌握在大型藥企手中，但在利用鯊魚進行抗體的制備方面，尚無專利壁壘，因此是一良好的契機。再者，眾多的鯊魚品種中，條紋斑竹鯊(Chiloscylliumplagiosum)不屬于瀕危鯊魚種類，且體型小、易于人工繁養，最適合做抗體開發。

但是，目前條紋斑竹鯊的全基因組序列未知，對其免疫組庫的研究較少，很大程度上限制了其納米抗體的開發。針對條紋斑竹鯊vNAR的擴增，目前的文獻僅報道了使用一對引物進行擴增，而該對引物是根據其它種類的鯊魚設計的。由于鯊魚vNAR基因序列的多樣性，決定了僅用目前報道的引物進行免疫組庫的擴增建庫，必定會造成數據的損失。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種擴增條紋斑竹鯊免疫球蛋白新抗原受體可變區的成套引物。

本發明提供了成套引物，其包括引物組甲和引物組乙；

所述引物組甲包括50條引物中的至少一條；

所述50條引物分別為序列13所示的單鏈DNA分子或其衍生物至序列62所示的單鏈DNA分子或其衍生物；

所述引物組乙包括42條引物中的至少一條；

所述42條引物分別為序列63所示的單鏈DNA分子或其衍生物至序列104所示的單鏈DNA分子或其衍生物。

上述成套引物中，每條所述單鏈DNA分子的衍生物為將該條單鏈DNA分子的核苷酸序列經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與該條單鏈DNA分子具有相同功能的DNA分子。

上述成套引物中，所述引物組甲中的各條引物的配比均為等摩爾比；

和/或，所述引物組乙中的各條引物的配比均為等摩爾比；

上述成套引物中，所述引物組甲中一條引物與所述引物組乙中的一條引物的摩爾比為1：10-10：1；