[發明專利]一種生產紅藻糖苷的方法及其專用工程菌

在審

• 申請號: 201811353165.1
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN111187799A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 史魯秋;汪昌國;蘇桂珍;薛虹宇;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 南京盛德生物科技研究院有限公司;南京華獅新材料有限公司;南京美榮生物技術有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 江蘇舜點律師事務所 32319
• 代理人: 徐旭棟

本發明公開了一種生產紅藻糖苷的方法及其專用工程菌，涉及生物技術領域，解決提高紅藻糖苷轉化率的問題，其技術方案要點是：包括如下步驟：以甘油和半乳糖為原料，在工程菌或者在功能蛋白的作用下，生產紅藻糖苷；所述工程菌為表達功能蛋白的重組菌，是將編碼所述功能蛋白的功能基因導入出發菌得到的；所述功能蛋白為如下（a1）或（a2）或（a3）：（a1）序列表的序列1、序列3、序列5所示的蛋白質；（a2）在（a1）的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質；（a3）序列表的序列7所示的蛋白質。

技術領域

本發明涉及生物技術領域,更具體地說，它涉及一種生產紅藻糖苷的方法及其專用工程菌。

背景技術

紅藻糖苷是藻類重要的光合產物，主要有三種構型，即紅藻糖苷(α-D-galactopyransyl-(1-2)-glycerol)、D-異紅藻糖苷和L-異紅藻糖苷(α-D/L-galactopyranosyl-(1-1)-glycerol)。它是諸多藻類最主要的可溶性碳水化合物，同高等植物中的蔗糖具有同樣的作用，一般占藻體干重的1.5%-8.0%。紅藻糖苷在單細胞紅藻中可直接作為合成細胞壁的前體物質，同時紅藻糖苷參與滲透壓的調節。近年來紅藻糖苷在化妝品領域有著很好的應用，它不僅具有很好的保濕作用，還有顯著的美白功效。

合成紅藻糖苷的底物是半乳糖和甘油，合成場所是在大部分紅藻的胞液內，合成后在細胞內短時間存在，在細胞新陳代謝的過程中可以被分解成為其他碳水化合物（如紅藻淀粉和瓊膠的前體）。

目前，紅藻糖苷的生產方法主要是提取法（水-乙醇提取），然而目的產物的轉化率低，使得紅藻糖苷價格較高，沒有在化妝品中得到廣泛應用。

綜上所述，本領域迫切需要開發一種新的高效生產紅藻糖苷的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種生產紅藻糖苷的方法，達到提高紅藻糖苷轉化率的目的。

本發明的上述技術目的是通過以下技術方案得以實現的：一種生產紅藻糖苷的方法，包括如下步驟：以甘油和半乳糖為原料，在工程菌或者在功能蛋白的作用下，生產紅藻糖苷；所述工程菌為表達功能蛋白的重組菌，是將編碼所述功能蛋白的功能基因導入出發菌得到的；

所述功能蛋白為如下（a1）或（a2）或（a3）：

（a1）序列表的序列1、序列3、序列5所示的蛋白質；

（a2）在（a1）的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質；

（a3）序列表的序列7所示的蛋白質。

本發明進一步設置為：反應溫度為30℃-40℃、反應pH為4.0-6.0。

本發明進一步設置為：所述工程菌為進行誘導培養后的工程菌；所述誘導培養為采用L-阿拉伯糖進行誘導并培養。

本發明進一步設置為：所述出發菌為大腸桿菌。

本發明進一步設置為：所述功能基因通過重組質粒導入出發菌；所述重組質粒是將所述功能基因插入出發載體得到的。

本發明進一步設置為：所述出發載體為pBAD/HisB載體。

本發明的另一個目的是提供一種重組菌，是將重組質粒導入出發菌得到的；所述重組質粒為將編碼功能蛋白的功能基因導入出發載體得到的；所述出發載體為pBAD/HisB載體；所述出發菌為大腸桿菌BW25113；所述功能蛋白為如下（a1）或（a2）或（a3）：

（a1）序列表的序列1、序列3、序列5所示的蛋白質；

（a2）在（a1）的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質；

（a3）序列表的序列7所示的蛋白質。