[發明專利]一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201811348070.0
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN109298188A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 唐小江
• 申請（專利權）人: 廣東眾爾健生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/70
• 分類號: G01N33/70;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

1.一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條，包括由底板(1)，其特征在于，所述的底板(1)依次銜接有樣品墊(2)、結合墊(3)、層析膜(4)、肌酐試紙(5)和吸水墊(6)，所述的層析膜上設有C線和T線，在結合墊(3)上噴有同一種膠體金顆粒標記的重金屬離子抗體；在層析膜(4)上T位置包被熒光微球標記的重金屬離子抗原，C線位置包被的是熒光微球標記的BSA。

2.根據權利要1所述的一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條，其特征在于，所述的重金屬離子抗體為Cd²⁺抗體或者Cr³⁺抗體或者Hg²⁺抗體或者Pb²⁺抗體或者As³⁺抗體或其它重金屬離子抗體；所述的重金屬離子抗原為Cd²⁺抗原或者Cr³⁺抗原或者Hg²⁺抗原或者Pb²⁺抗原或者As³⁺抗原或其它重金屬離子抗原。

3.制備權利要求1所述的一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條的方法，其特征在于，依次包括下述步驟：

將膠體金顆粒標記的金屬粒子抗體用噴金劃膜儀噴覆到結合墊上，烘干后按照從結合墊到吸水墊的方向，依次把按體積稀釋100-140倍的熒光標記完全抗原和按體積稀釋100-140倍的熒光標記BSA用噴金劃膜儀包被到層析膜上，分別作為C線和T線，再次烘干，最后，在底板(1)依次銜接有樣品墊(2)、結合墊(3)、層析膜(4)、肌酐試紙(5)和吸水墊(6)，并且在結合墊(3)上噴有同一種膠體金顆粒標記的重金屬離子抗體；在層析膜上T位置包被熒光微球標記的重金屬離子抗原，C線位置包被的是熒光微球標記的BSA。

4.根據權利要求3所述的一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述的膠體金顆粒標記的金屬粒子抗體的方法為：

A、膠體金的制備：

在100mL錐形瓶中裝有50mL超純水，將其放在磁力加熱攪拌器上攪拌并加熱至沸騰；準確加入1mL 1％的氯金酸后加入1.8mL 1％的檸檬酸三鈉，加熱攪拌10分鐘后停止加熱繼續攪拌至所制備的膠體金溶液冷卻，4℃保存備用；

B、膠體金標記抗體的制備：

取步驟A制備好的膠體金溶液5mL，用0.25M碳酸鉀溶液將膠體金溶液的pH值調節為8.5，邊加入50μL 0.85mg/mL的抗重金屬-iEDTA抗體，攪拌30分鐘；加入500μL 1％聚乙二醇20000，混勻反應30分鐘后離心，棄上清液，將沉淀物用500mL復溶解液復溶，4℃保存備用。

5.根據權利要求4所述的一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述的復溶解液為0.02M PB溶液中含5％海藻糖、2％蔗糖、1％BSA、0.5％Tween-20 以及0.1％PEG4000。

6.根據權利要求3所述的一種重金屬和肌酐聯合檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述的熒光標記完全抗原的制備方法為：

將200μL 130nm熒光微球加入到離心管中，再加入800μL超純水，避光混勻；接著加入20μL 1mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺和40μL 1mg/mL的碳二亞胺，混勻后室溫活化反應30分鐘；取活化后的熒光微球于另一離心管，再加入對應體積的2mg/mL的完全抗原重金屬-iEDTA-BSA，混勻后室溫避光反應2小時；加入10％牛血清白蛋白使BSA最終為1％，混勻后室溫反應1小時離心分離，離心后收集沉淀物并且用復溶解液復溶至原體積的兩倍，得到熒光標記完全抗原，4℃避光保存。