[發(fā)明專利]生物標(biāo)志物的識(shí)別信號(hào)轉(zhuǎn)換成可見光色譜的標(biāo)記方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811340761.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN109254002A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣波;鄧嘯鳴;馮歡歡;李曉磊;李霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N33/533;G01N33/577
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 苗艷榮

本發(fā)明公開了一種對(duì)生物標(biāo)志物的識(shí)別信號(hào)轉(zhuǎn)換成可見光色譜的標(biāo)記方法及應(yīng)用，利用聯(lián)乙炔單體和磷脂分子制備具有力致變色特征的脂質(zhì)體，將該脂質(zhì)體修飾在能夠特異性識(shí)別待測(cè)標(biāo)志物的抗體、凝集素或多肽分子等探針分子表面，探針分子與目標(biāo)待測(cè)標(biāo)志物反應(yīng)，導(dǎo)致該脂質(zhì)體發(fā)生力致變色，得到將探針分子對(duì)待測(cè)生物標(biāo)志物的識(shí)別信號(hào)，轉(zhuǎn)換成肉眼可見的可見光色譜的標(biāo)記方法，根據(jù)溶液發(fā)生的顏色變化進(jìn)行定性判斷。本發(fā)明方法及標(biāo)記物在可見光范圍發(fā)生明顯的顏色變化，所需成分更少，所耗成本更低，反應(yīng)過程更快。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)、臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)及快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種對(duì)生物標(biāo)志物的識(shí)別信號(hào)轉(zhuǎn)換成可見光色譜的標(biāo)記方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著老齡化社會(huì)到來，骨科疾病對(duì)人體的危害程度日顯突出，對(duì)相關(guān)疾病早期診斷、進(jìn)程掌握的要求也越來越高。病理上對(duì)人體骨骼代謝及相關(guān)疾病認(rèn)識(shí)清晰，針對(duì)骨的生理狀態(tài)(骨形成與吸收)綜合評(píng)估是判斷骨發(fā)育、骨衰減以及骨流失，從而對(duì)骨疾病進(jìn)行診斷分析的基礎(chǔ)。其中I型膠原是骨結(jié)構(gòu)中最主要的成分之一，在骨組織中骨基質(zhì)代謝中，I型膠原被降解，生成的分子片段被釋放在血液或尿液中，這些小片段能夠有效的反應(yīng)骨形成與吸收。反映骨形成的標(biāo)志物片段有I型原膠原羧基端前肽(PICP)，反映骨吸收的標(biāo)志物片段有I型膠原吡啶交聯(lián)終肽(ICTP)與I型膠原羧基端肽(CTX)等等，同時(shí)其它類型膠原降解生成的尿吡啶醚(PYD)和脫氧吡啶醚(DPD)也是反映骨吸收的重要指標(biāo)。因此快速檢測(cè)血清、尿液中I型膠原的上述分子片段是骨疾病分析診斷的主要方法，也是快速診斷的基礎(chǔ)。

在諸多針對(duì)I型膠原及其分子片段的檢測(cè)方法中，基于免疫學(xué)分析檢測(cè)方法是綜合評(píng)估的重要方法。免疫標(biāo)記技術(shù)(IA)是指在已知抗原或抗體上標(biāo)記某種易于檢測(cè)的物質(zhì)，通過將抗原與抗體的特異性結(jié)合，轉(zhuǎn)換成其它信號(hào)，檢測(cè)某些分子的存在與否或濃度大小。由于這一技術(shù)使用的標(biāo)記物種類多樣，其中許多產(chǎn)物制備簡(jiǎn)單，成本低廉，因此它在多種不同的應(yīng)用領(lǐng)域中具有極大的應(yīng)用價(jià)值。并且不同的標(biāo)記物轉(zhuǎn)換出的信號(hào)也不同，根據(jù)標(biāo)記物不同可將免疫標(biāo)記技術(shù)分為，放射免疫標(biāo)記技術(shù)、酶聯(lián)免疫標(biāo)記技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫標(biāo)記技術(shù)、熒光免疫標(biāo)記技術(shù)以及膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)等。這些標(biāo)記方法共同的問題是不適用于快速檢測(cè)和半定量分析，特別不適于老齡化社會(huì)的社區(qū)醫(yī)院及家庭養(yǎng)老。下面例舉已有標(biāo)記技術(shù)存在著的不足之處：

(1)放射免疫標(biāo)記技術(shù)：存在微弱的放射性污染，廢料處理難度大；放射性同位素半衰期的存在增大了實(shí)驗(yàn)操作難度；

(2)酶聯(lián)免疫標(biāo)記技術(shù)：酶標(biāo)記物容易失活；靈敏度不高；反應(yīng)過程相對(duì)復(fù)雜；

(3)熒光免疫標(biāo)記技術(shù)：反應(yīng)過程迅速，但同時(shí)易受到光散射以及樣品內(nèi)源性熒光物質(zhì)的影響；

(4)發(fā)光免疫標(biāo)記技術(shù)：需要額外的固相載體，操作過程相對(duì)復(fù)雜；

(5)膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)：靈敏度受影響，技術(shù)要高，操作過程困難。

綜上所述，針對(duì)目前因?yàn)闃?biāo)記帶來的不利于基層醫(yī)院及家庭快速診斷方法，該發(fā)明基于免疫分析，設(shè)計(jì)一種新型標(biāo)記方法，對(duì)尿液、血清中I型膠原分子片段的快速診斷、床前診斷(POCT)，對(duì)小孩、老人尤為重要。對(duì)比用各種不同標(biāo)記與分析方法，采用了一種基于力致變色技術(shù)，成為可見光顏色信號(hào)的轉(zhuǎn)換方式，并制備成顏色譜圖或比色板，適用于對(duì)家庭育兒與養(yǎng)老及其它需要簡(jiǎn)單、快速而又科學(xué)判斷的地方。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于建立一種新的免疫標(biāo)記方法，利用力致變色技術(shù)，將抗體抗原間特異性結(jié)合力轉(zhuǎn)換成為肉眼可見的光信號(hào)。這種可見關(guān)光信號(hào)以顏色變化為特征，從而設(shè)計(jì)出一種適用于快速檢測(cè)I型膠原的新型免疫分析技術(shù)。

本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的免疫標(biāo)記方法，包括：

利用聯(lián)乙炔結(jié)構(gòu)單體和磷脂分子聚集體，制備具有力致變色為可見光信號(hào)脂質(zhì)體；