[發明專利]一株防治水蜜桃采后褐腐病的間型假絲酵母菌株及其應用

在審

• 申請號: 201811336829.3
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109468238A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 孫衛紅;周秋陽
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;A23B7/155;C12R1/72
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株防治水蜜桃采后褐腐病的間型假絲酵母菌株，保藏名稱為:間型假絲酵母C17，Candida intermedia C17；保藏號為CCTCC NO:M 2018584。

2.利用權利要求1所述的防治水蜜桃采后褐腐病的間型假絲酵母菌株制備用于防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性凍干粉的方法，其特征在于按照以下步驟進行：

(1)間型假絲酵母(Candida intermedia)C17菌株的活化：從斜面挑取保藏的菌株劃線接種于NYDA(Nutrient Yeast Dextrose Agar)瓊脂培養基中，28℃恒溫培養2-3d；

(2)酵母菌富集培養：挑取步驟(1)中活化好的C17菌株單菌落，接種于NYDB(NutrientYeast Dextrose Broth)液體培養基中(50mL/250mL)，180r/min，28℃恒溫震蕩培養24h，得到菌株C17的種子液；然后將發酵液以1:100的接種量接入NYDB培養基中，180r/min，28℃恒溫震蕩培養48h，得到間型假絲酵母(Candida intermedia)C17菌株的細胞培養液；

(3)菌泥的制備：取30mL步驟(2)中富集培養好的酵母菌液，在4℃條件下，6000r/min離心10min，倒掉上清液得到菌體沉淀，備用；

(4)添加凍干保護劑：重懸步驟(3)中酵母細胞沉淀于30mL凍干保護劑溶液中，充分混勻，平衡30min；

(5)分裝：將添加保護劑的酵母菌懸液混合均勻后倒入直徑9cm的平板中，使厚度約為0.5cm；

(6)預冷凍：將分裝好的平板用保鮮膜封口，迅速放入-80℃恒溫冰箱中，預冷凍3h；

(7)真空冷凍干燥：將預冷凍完成的平板迅速轉移到預冷至-30℃以下的冷凍干燥機中，打開真空泵，冷凍干燥機冷阱溫度為-50℃，抽真空冷凍干燥48h；

(8)密封保存：冷凍干燥完成的平板迅速轉移到超凈工作臺內，用保鮮膜和封口膜進行密封。

3.根據權利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性凍干粉的制備方法，其特征在其中步驟(1)中NYDA瓊脂培養基組成如下：酵母浸膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，瓊脂20g，補充蒸餾水至1000mL，自然pH，121℃滅菌20min。

4.根據權利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性凍干粉的制備方法，其特征在其中步驟(2)中NYDB培養基組成如下：酵母浸膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，補充蒸餾水至1000mL，自然pH，121℃滅菌20min。

5.根據權利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性凍干粉的制備方法，其特征在其中步驟(4)中凍干保護劑溶液中含有質量百分濃度為：5.43％山梨醇，12.45％海藻糖和13.56％谷氨酸鈉；其余為水。

6.根據權利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性凍干粉的制備方法制備得到的生防活性凍干粉的使用方法，其特征在按照下述步驟進行：使用時將活性凍干粉用無菌水懸浮并調整酵母濃度至1×10⁸cells/mL，將水蜜桃在菌液中浸泡10min后取出，自然晾干，即可顯著降低桃果實褐腐發病率和自然腐爛率，并延緩桃果實可溶性固形物，總酸及Vc含量的降低；抑制果實失重率和果皮細胞膜透性的增加；提高多酚氧化酶(PPO)和過氧化物酶(POD)的酶活性。