[發明專利]一種氟乙酰胺半抗原及單克隆抗體的制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811324738.8
• 申請日: 2018-11-08
• 公開（公告）號: CN109575123B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 王戰輝;沈建忠;溫凱;江海洋;楊玲;史為民;張西亞;張素霞
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/795;C07K1/02;C07K16/44;C12N5/20;G01N33/53;C07C233/47;C07C233/54;C07C231/02;C07C231/12;C07C53/18;C07C51/09;C07C53/40;C07C
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明涉及生物化工技術領域，具體公開了一種氟乙酰胺半抗原及單克隆抗體的制備方法與應用。本發明以氟乙酸乙脂、對氨基苯乙酸為主要原料，合成氟乙酰胺半抗原；用活潑脂法將其與載體蛋白牛血清白蛋白(BSA)或血藍蛋白(KLH)偶聯制備偶聯物。經試驗驗證表明，本發明制得的偶聯物可使生物體產生針對氟乙酰胺的抗體，即所制得的偶聯物為一種氟乙酰胺人工抗原。本發明所制備的氟乙酰胺人工抗原適合用于氟乙酰胺的酶聯免疫分析。

技術領域

本發明涉及生物化工技術領域，具體地說，涉及一種氟乙酰胺半抗原及單克隆抗體的制備方法與應用。

背景技術

氟乙酰胺(fluoroacetamide)，又稱2-氟乙酰胺、敵蚜胺、邱氏滅鼠藥。純品為無味、無臭白色針狀結晶或白色粉末，易溶于水(1:5)，在酸性、中性水溶液中水解為氟乙酸(fluoroacetic acid)，在堿性水溶液中水解為氟乙酸鈉(sodiumfluoroacetate)。制作工藝簡單，由氯乙酰胺氟化而得。氟乙酰胺可通過皮膚、呼吸道和消化進入體內，造成中毒事件，若搶救不及時引發死亡，影響三磷酸腺苷的生成以及中間產物代謝過程，生成的氟乙酰和氟檸檬酸可造成心、腦、肺、肝等多臟器的損傷，氟乙酰胺阻止三羧酸循環的過程又導致高活性氧自由基激增，ATP生成的減少，細胞膜結構松散，電子結構不穩定，因此，極容易被氧自由基奪去電子，所以細胞膜容易被自由基攻擊。由于其強神經毒性，且具有二次帶毒現象，對大白鼠急性口服致死中量(LD50)，氟乙酰胺為5.3mg/kg，氟乙酸鈉為0.22mg/kg，還易被皮膚吸收，又無警戒性，且易造成二次中毒。貓吃了用氟乙酰胺或氟乙酸鈉殺死的老鼠會中毒致死，鳥吃了用氟乙酰胺殺死的害蟲會被毒死，貓和狗吃了被毒死的鳥也會中毒致死。

由于氟乙酰胺的劇毒、速效、合成簡單、價格便宜和不易產生耐藥性等特點，被用于投毒事件時有發生，因此，完善快速檢測機制和采用對癥的治療方法可以在最大程度上降低氟乙酰胺對人類健康的危害。目前，氟乙酰胺的檢測方法主要有基于理化和免疫的分析方法，前者包括薄層色譜法、化學顯色法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。化學顯色法是目前常用的快速檢測方法，氟乙酰胺遇到強堿性的奈氏試劑水解生成氨，與奈氏試劑作用生成黃棕色沉淀，最低檢出量0.5μg，陽性率：51.57％，雖然操作簡便，成本低廉，檢測迅速，但由于是化學半定量檢測方法，靈敏度低，陽性率低等，已經難以滿足檢測限的需要；而其他儀器分析方法雖然靈敏度高、重現性好，但同時存在耗時、檢測儀器昂貴、操作復雜等特點，不能滿足現場快速檢測的需求；而酶鏈免疫吸附反應、免疫芯片等免疫學檢測方法由于節省時間、成本低、操作簡便，適合現場檢測，正逐步受到我國各質檢相關部門的重視。

氟乙酰胺作為半抗原，需將其與載體蛋白偶聯后，才能具備刺激動物產生抗體的免疫原性。但由于氟乙酰胺是小分子物質，相對分子量只有76，不具有免疫原性，此外，雖然氟乙酰胺有裸露的氨基，但由于構成酰胺鍵，不易發生化學反應。這給研究氟乙酰胺的免疫學檢測方法帶來很大困難，也在一定程度上阻礙了免疫學方法的應用和推廣。

綜合上述原因，研究氟乙酰胺偶聯物制備方法是非常必要的。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種氟乙酰胺半抗原及單克隆抗體的制備方法與應用。

為了實現本發明目的，本發明的技術方案如下：

第一方面，一種氟乙酰胺半抗原，分子結構式如式Ⅰ所示：

其中，A選自苯環或(CH₂)n；n＝1～20。

在本發明的具體實施方式中，以A為苯環，和A為(CH₂)₄作為示例性說明，二者的化學結構式如式II和式III所示：