[發(fā)明專利]一種鑒定子宮內(nèi)膜癌生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811323625.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109342593A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗娟;曾鵬嬌;姚勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種鑒定子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒。所述生物標(biāo)記物為血清中經(jīng)過(guò)柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖。本發(fā)明檢測(cè)方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法。本發(fā)明的技術(shù)方案具有前處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，儀器價(jià)格合理，符合常規(guī)使用，操作步驟簡(jiǎn)單易學(xué)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高，只需采血經(jīng)高效液相色譜分析后便可區(qū)分正常人和子宮內(nèi)膜癌患者，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優(yōu)點(diǎn)。所得結(jié)果顯示此分析方法可以快速定量子宮內(nèi)膜癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對(duì)于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與子宮內(nèi)膜癌之間的關(guān)系、尋找新型子宮內(nèi)膜癌臨床檢測(cè)標(biāo)志物有著非常重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

子宮內(nèi)膜癌是最常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，好發(fā)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性。據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)2012年約有320,000婦女被診斷出子宮內(nèi)膜癌和造成76,000人死亡。這使它成為繼宮頸癌后的第二大女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤。子宮內(nèi)膜活檢和經(jīng)陰道超聲檢查聯(lián)用的是標(biāo)準(zhǔn)的子宮內(nèi)膜癌的術(shù)前診斷檢查手段。此外還有CT掃描，核磁共振成像，活檢等技術(shù)，但都不能給出診斷性的結(jié)果。血液檢查中目前最常用的臨床檢測(cè)標(biāo)記物是糖鏈抗原CA125、人附睪蛋白4(HE4)，但其靈敏度較低，不易有效篩檢病人。這些診斷方法均會(huì)帶來(lái)一定的弊端。因此，尋找一種方便，無(wú)創(chuàng)傷的檢測(cè)方法是十分必要的。而最理想的就是不需活檢，且靈敏性和特異性高的血清分析。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫(yī)院檢驗(yàn)科可以直接通過(guò)測(cè)生化指標(biāo)檢測(cè)葡萄糖濃度，暫時(shí)不可以直接檢測(cè)甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認(rèn)為是由細(xì)胞中的葡萄糖異構(gòu)化而來(lái)。而近來(lái)有研究表明，細(xì)胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動(dòng)物血液中游離甘露糖的主要來(lái)源。這兩部分來(lái)源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩(wěn)定。D-甘露糖是糖蛋白，細(xì)胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結(jié)構(gòu)中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復(fù)合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來(lái)源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測(cè)定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質(zhì)譜法和毛細(xì)管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時(shí)，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過(guò)程比較繁瑣；氣液色譜-質(zhì)譜法儀器價(jià)格昂貴，不適合常規(guī)目的；所需血清樣本量大。目前沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了用于鑒定子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)記物及其應(yīng)用，本發(fā)明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測(cè)。本發(fā)明的技術(shù)方案可以用于檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于鑒定子宮內(nèi)膜癌患者。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

用于鑒定子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)記物，所述生物標(biāo)記物為血清經(jīng)過(guò)柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖。

用于鑒定子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調(diào)節(jié)pH為7-14：取待檢測(cè)的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個(gè)樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應(yīng)；

(3)加酸中和反應(yīng)：將烘箱內(nèi)的樣品取出，放置冷卻，每個(gè)樣品加入鹽酸，渦旋混勻；