[發明專利]一種五肽及其應用

有效

• 申請號: 201811311659.3
• 申請日: 2018-11-06
• 公開（公告）號: CN109608518B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 韋宇平;焦朋飛;王鵬;柳成賓;滕伯遠
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K14/765;C07K1/22;B01J20/24;B01J20/30
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

本發明提供一種五肽，所述五肽的氨基酸序列為：Lys?Phe?Phe?Ser?Cys。本發明的五肽能夠與血清白蛋白特異性結合，能夠用于從混合物中分離純化或清除血清白蛋白。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種五肽及其應用。

背景技術

血清白蛋白是脊椎動物血漿中含量最豐富的蛋白質，具有結合和運輸內源性與外源性物質，維持血液滲透壓，清除自由基，抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能。血清白蛋白的氨基酸序列非常保守，不同來源的血清白蛋白都有類似的空間結構。血清白蛋白廣泛應用于生物、醫藥和化工等領域，社會經濟效益可觀。目前血清白蛋白多采用鹽析、離子交換層析來分離，分離過程復雜，且分離效果不盡如人意。所以血清白蛋白的分離純化技術依然有待提高。

親和分離是利用某些親和配體特異識別和可逆結合生物大分子的特性而建立起來的一種分離純化方法，通常只需一步處理即可得到純度較高的某種蛋白質。親和配體是親和分離的核心，因此開發血清白蛋白親和配體，對血清白蛋白的分離純化技術提高至關重要。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種五肽，其能夠與血清白蛋白特異性結合，從而能夠從混合物中分離純化或清除血清白蛋白。

本發明提供一種五肽，所述五肽的氨基酸序列為：Lys-Phe-Phe-Ser-Cys。

本發明還提供上述五肽在特異性結合血清白蛋白中的應用。

本發明與現有技術相比，具有以下優點和有益效果：

1)高效：血清白蛋白吸附肽可以與血清白蛋白特異性結合。

2)安全：血清白蛋白吸附肽序列短，無免疫原性，安全無毒。

3)經濟：血清白蛋白吸附肽由固相合成而得，技術十分成熟。

4)Cys末端的巰基實現定向交聯，介質制備簡單。

因而采用本發明的血清白蛋白吸附肽作為親和配體，可以實現血清白蛋白從混合物中的分離純化或清除。

具體實施方式

以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市售。

實施例1多肽合成

1)活化樹脂：稱取1000mg Fmoc Cys-wang Resin，在DMF中浸泡30min溶脹。

2)脫保護：抽濾除去DMF，加入含20％哌啶的DMF溶液氮氣吹沸20min，壓濾除去；用異丙醇洗滌樹脂三次，DMF洗三次，而后用茚三酮法檢測樹脂Fmoc脫除狀況。

3)縮合反應：連接氨基酸Ser，稱取1.4mmol FMOC-Ser，以TBTU/HOBt/DIEA的DMF混合溶液為反應液，室溫下氮氣吹沸反應3h。反應后，用異丙醇洗滌樹脂三次，然后用DMF洗滌樹脂三次，分別抽濾除去，茚三酮法檢測。Fmoc合成為C端開始，N端結束。

4)重復步驟2)～3)：依次將Ser、Phe、Phe和Lys連接完畢，完成多肽鏈延伸。多肽自N端至C端如下：Lys-Phe-Phe-Ser-Cys。

5)多肽切割：用氮氣將多肽-樹脂復合物吹干，采用phenol/H₂O/thioanisole/EDT/TIS的TFA混合溶液為切割試劑，磁力攪拌3小時，抽濾液直接滴入冷凍乙醚中，3000r/min離心收集沉淀，凍干至恒重即得粗肽。