[發明專利]一種宮內膜干細胞保護液及其制備方法

在審

• 申請號: 201811309119.1
• 申請日: 2018-11-05
• 公開（公告）號: CN109566597A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 董明珠;宋莉莉;潘新;劉世紅;盧家堃
• 申請（專利權）人: 北京世紀勁得生物技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松

本發明提供了一種宮內膜干細胞保護液及其制備方法。本發明提供的保護液包括1?5份的肝素鈣、20?40份的低分子右旋糖苷、1?2份的罌粟堿、5?10份的海藻糖、800?1000份的水和4?6份的中藥提取物。本發明提供的宮內膜干細胞保護液不含血清，價格低廉，保存的宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率較高，隨著時間的延長，減緩宮內膜干細胞的復蘇率的降低速率。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種宮內膜干細胞保護液及其制備方法。

背景技術

宮內膜干細胞具有高度增殖活性及自我再生能力，在細胞治療和再生醫學中有著重要的臨床醫學價值，目前已經可以在體外培養擴增宮內膜干細胞，用于科學研究、藥物篩選測試、臨床應用等，為了方便的取用體外培養擴增的宮內膜干細胞，一般需要對培養出的宮內膜干細胞進行凍存和復蘇，目前，一般的宮內膜干細胞凍存時使用的凍存液分為含血清型和無血清型兩類，含血清型凍存液成分復雜、價格昂貴且質量難以控制，因而無血清型凍存液的應用越來越多，無血清型凍存液主要含有70％的無血清培養基、20％牛血清白蛋白和10％二甲基亞砜，放置于無血清凍存液中保存的宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率隨著時間延長而大幅度降低，嚴重影響后續的使用。

發明內容

為了解決現有技術中宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率較低等問題，本發明提供了一種宮內膜干細胞保護液，該保護液不含血清，價格低廉，保存的宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率較高，隨著時間的延長，減緩宮內膜干細胞的復蘇率的降低速率。

本發明具體技術方案如下：

本發明提供了一種宮內膜干細胞保護液，該保護液包括如下重量份的各成分：

1-5份的肝素鈣、20-40份的低分子右旋糖苷、1-2份的罌粟堿、5-10份的海藻糖、800-1000份的水和4-6份的中藥提取物；

所述中藥提取物由如下重量份的成分制備而成：

進一步地，中藥提取物由如下重量份的成分制備而成：

本發明通過在保護液中加入肝素鈣、低分子右旋糖苷、罌粟堿、海藻糖、水和中藥提取物，為宮內膜干細胞提供充足的養分，減慢其新陳代謝速度，提高宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率。

進一步地，中藥提取物的提取方法包括如下步驟：

1)取配方量的青葉膽洗凈、粉碎，放置于50-70℃溫水中減壓浸提兩次，每次浸提1-2h，青葉膽與50-70℃溫水的固液比為1:10-12，浸提真空度為0.7-0.9Mpa，合并各次浸提液，得青葉膽浸提液；

2)取配方量的香附、蔓荊子和薤白放置于濃度為40-60％的乙醇溶液中超聲30-40min，香附、蔓荊子和薤白的總重量與40-60％的乙醇溶液的固液比為1:40-60，超聲頻率為40-60KHz，得超聲提取液；

3)將步驟1)獲得的青葉膽浸提液與步驟2)獲得的超聲提取液合并，混合均勻，濃縮干燥至粉末，即得中藥提取物。

其中，固液比是指某物質的重量g與液體的體積mL的比。

本發明通過以上方法制備中藥提取物，通過各中藥中不同的有效成分的配伍，與肝素鈣、低分子右旋糖苷、罌粟堿和海藻糖共同作用，協同增效，進一步地提高宮內膜干細胞凍存復蘇后的復蘇率。

進一步地，保護液還包括重量份數為4-10份的維生素B6、2-4份的氯化鎂和10-20份的N-乙酰半胱氨酸。

本發明通過在保護液中加入維生素B6、氯化鎂、和N-乙酰半胱氨酸的混合物，能夠很好地保持凍存復蘇后的宮內膜干細胞的特性。