[發(fā)明專利]一種布魯氏菌間接ELISA檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811301269.8
• 申請(qǐng)日: 2018-11-02
• 公開（公告）號(hào): CN109142757A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹小安;李學(xué)瑞;趙鷺;周建華;蘭喜;馬麗娜;尚佑軍;劉永生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇

本發(fā)明提供一種布魯氏菌間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒以布魯氏菌wzt重組蛋白為包被抗原。本發(fā)明的試劑盒能夠高敏感以及高特異的檢測(cè)布魯氏菌，能夠用于布魯氏菌的診斷和科學(xué)研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)和診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種布魯氏菌間接ELISA檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種可以感染人和家畜的人畜共患病，家畜中主要感染牛、羊、豬、犬，其中牛和羊的感染情況最為嚴(yán)重，動(dòng)物患病會(huì)引起懷孕動(dòng)物流產(chǎn)、產(chǎn)奶下降、不育等癥狀，人患病會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛、全身困乏、發(fā)熱等癥狀。布魯氏菌病的傳播給畜牧業(yè)和人類健康帶來很大的危害，全世界每年新發(fā)感染人數(shù)大約為50萬人，除少數(shù)發(fā)達(dá)國家外，有170多個(gè)國家存在布魯氏菌病。感染布魯氏菌病主要是與患病動(dòng)物尤其是患病的妊娠動(dòng)物、未加工的肉制品或是乳制品接觸。

布魯氏菌的致病機(jī)制是其能夠在宿主單核巨噬細(xì)胞中生存，即使在低氧、營養(yǎng)不足、酸性環(huán)境、和存在氧化物的條件下仍能生存。并且布魯氏菌是胞內(nèi)寄生菌，一旦感染難以通過抗生素治療。即使感染動(dòng)物自愈，仍有持續(xù)排菌的危險(xiǎn)。

在布魯氏菌病診斷方面，ELISA試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡單、結(jié)果易于判定等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種布魯氏菌間接ELISA檢測(cè)試劑盒，能夠用于布魯氏菌病抗體的定性檢測(cè)，具有特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好、易于操作的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明提供一種布魯氏菌間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒以布魯氏菌wzt重組蛋白為包被抗原。

作為優(yōu)選，所述重組蛋白的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.2。

作為優(yōu)選，所述重組蛋白的制備方法為：將布魯氏菌wzt基因片段克隆至pET30a(+)表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)處，獲得重組質(zhì)粒pET-30a-wzt，將重組質(zhì)粒pET-30a-wzt轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，收集上清液進(jìn)行純化，得到純化后的重組蛋白。

作為優(yōu)選，所述試劑盒還包括封閉液，所述封閉液為Casein。

作為優(yōu)選，所述試劑盒還包括包被緩沖液，所述包被緩沖液為0.025M pH9.6的碳酸鹽緩沖液。

作為優(yōu)選，所述試劑盒還包括血清稀釋液，所述血清稀釋液為Casein。

作為優(yōu)選，所述試劑盒還包括酶標(biāo)二抗，所述酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗羊IgG酶標(biāo)抗體。

本發(fā)明還提供上述試劑盒在檢測(cè)布魯氏菌中的應(yīng)用，所述應(yīng)用不以疾病的診斷和治療為目的。

本發(fā)明還提供上述布魯氏菌的間接ELISA檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法不以疾病的診斷和治療為目的，步驟如下：

(1)包被酶標(biāo)板：將純化后的權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)中所述的pET-30a-wzt重組蛋白包被微孔板；包被濃度為15μg/mL；包被條件為4℃包被過夜；

(2)封閉酶標(biāo)板；所述封閉為于37℃封閉3h，封閉時(shí)的封閉液為Casein；

(3)加入稀釋后的待檢血清，于37℃反應(yīng)1h；所述稀釋為將待檢血清用血清稀釋液以1:80進(jìn)行稀釋；

(4)加入稀釋后的酶標(biāo)二抗，于37℃反應(yīng)30min或90min；所述稀釋為將酶標(biāo)二抗用酶標(biāo)二抗稀釋液以1:5000進(jìn)行稀釋；

(5)顯色，終止，并在酶標(biāo)儀上讀取OD₄₅₀nm值。

本發(fā)明的試劑盒能夠高敏感以及高特異的檢測(cè)布魯氏菌，能夠用于布魯氏菌病抗體的定性檢測(cè)，具有特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好、易于操作的優(yōu)點(diǎn)。還能夠用于布魯氏菌的診斷和科學(xué)研究。