[發明專利]免疫性血小板減少癥的miRNA標志物及試劑盒和應用

在審

• 申請號: 201811296997.4
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109295213A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 錢琤;吳天勤;任傳路;鄧安梅;嚴文穎;沈紅石;李征洋
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第一00醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 李浩

本發明提供了一種免疫性血小板減少癥的miRNA標志物及試劑盒和應用。該miRNA標記物為hsa?miR?302e，其堿基序列如SEQ ID NO：1所示；該miRNA標記物的引物的堿基序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。將miRNA標志物及其引物用于制備抑制免疫性血小板減少癥的藥物或制備免疫性血小板減少癥輔助診斷試劑盒。本發明的miRNA標記物能夠用于判斷免疫性血小板減少癥的進程和嚴重程度；在其基礎上開發的hsa?miR?302e引物及診斷試劑盒和檢測方法操作簡便，對受檢者的創傷性小，且靈敏度高，特異性強，可用于早期和不同階段免疫性血小板減少癥的診斷，具有明顯的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于醫學檢驗技術領域，尤其涉及一種免疫性血小板減少癥的miRNA標 志物及試劑盒和應用。

背景技術

MicroRNA(miRNA)是存在于體內的一種長度大約為19-23nt的微小非編碼 RNA，通過堿基配對原則與靶基因mRNA 5’-UTR或者3’-UTR中的互補序列結合， 使mRNA降解或者抑制相關蛋白質的翻譯，從而在轉錄后水平對基因的表達進行調 控，一個microRNA可能結合多個mRNA，一個mRNA也可能被多個microRNA所 調節。生物機體內約有1/3的基因受miRNA的調控。然而，ITP患者中具體有哪些 miRNA表達異常目前還存在爭議，miRNA在ITP的發生發展中的具體作用機制至今 還未闡明。

原發性免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia,ITP)是一種獲得性自身免疫性疾病。其特點為血小板生成減少及破壞增加，臨床以皮膚黏膜出血為 主，嚴重者可有內臟出血，出血風險隨年齡而增加。ITP的病因十分復雜，涉及包括 遺傳、感染、免疫功能異常等在內的眾多因素，目前普遍認為以免疫學發病機制為主， 患者體內產生針對血小板特異性糖蛋白GPIIb-IIIa和GPIb-IX的自身抗體，進而引發 單核/巨噬細胞Fc受體介導的血小板清除，導致血小板數量降低。ITP治療上多為對 癥治療，疾病進展可產生脊髓或顱內出血，嚴重影響患者生活質量，也帶來沉重的經 濟負擔。在中國，兒童ITP的年發病率約為46/100萬人口，成人為38/100萬人口。 ITP急性期一般六個月內自愈，但有20％-30％可發展為病程持續超過12個月、治療 較為棘手的慢性ITP和難治性ITP。

miRNA是調節基因表達的內源性非編碼RNA，在轉錄后水平對基因表達進行調 控，參與細胞周期、凋亡、分化和新陳代謝等生理過程。miRNA在細胞中表達失調 會導致免疫性血小板減少癥等多種疾病的發生，最新研究表明，一些miRNA在免疫 性血小板減少癥患者外周血異常表達，但何種miRNA與免疫性血小板減少癥的發生、 發展有關仍未達成共識。因此有必要尋找與免疫性血小板減少癥發生、發展有關的 miRNA，從而為臨床上判斷和治療免疫性血小板減少癥提供一種有效手段。

發明內容

基于現有技術免疫性血小板減少癥檢測與治療中所存在的問題，本發明的第一目的在于提供一種免疫性血小板減少癥的miRNA標志物；本發明的第二目的在于提供 一種免疫性血小板減少癥的miRNA標志物的引物；本發明的第三目的在于提供 miRNA標志物在制備抑制免疫性血小板減少癥的藥物或制備免疫性血小板減少癥輔 助診斷試劑盒中的應用；本發明的第四目的在于提供miRNA標志物的引物在制備抑 制免疫性血小板減少癥的藥物或制備免疫性血小板減少癥輔助診斷試劑盒中的應用； 本發明的第五目的在于提供一種免疫性血小板減少癥輔助診斷試劑盒；本發明的第六 目的在于提供一種檢測免疫性血小板減少癥的miRNA標志物的方法。

本發明的目的通過以下技術方案得以實現：

一方面，本發明提供一種免疫性血小板減少癥的miRNA標志物，該miRNA標 記物為hsa-miR-302e，其堿基序列為UAAGUGCUUCCAUGCUU(如SEQ ID NO：1 所示)。該hsa-miR-302e為hsa-miR-302e的初始miRNA在人細胞內被剪切并表達為 的成熟hsa-miR-302e。