[發明專利]一種具有脫色能力的細胞外多糖及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811290229.8
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109457001B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 穆軍;崔霞
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C02F1/56
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種具有脫色能力的細胞外多糖在廢水脫色上的應用，所述細胞外多糖經由海洋嗜冷菌菌株GHF10經種子培養、擴大發酵培養后的培養發酵液分離得到，

由甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖單糖組成，

各單糖的摩爾比例為：甘露糖:氨基葡萄糖:核糖:鼠李糖:半乳糖醛酸:氨基半乳糖鹽酸鹽:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖單糖＝1:0.25:0.24:0.05:0.04:0.03:1.66:1.08:0.01:0.02，

其特征在于，

色素為甲基橙、墨水藍、蘇木素、蕃紅、伊紅、溴酚藍中的一種；

所述海洋嗜冷菌菌株GHF10保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：中國，北京，中國科學院微生物研究所，保藏日期2018年10月12日，保藏編號CGMCC NO.16577。

2.根據權利要求1所述的具有脫色能力的細胞外多糖在廢水脫色上的應用，其特征在于，所述細胞外多糖的制備步驟如下：

(1)將海洋嗜冷菌菌株GHF10接種到固體培養基上25～33℃種子培養24～36h，然后加固體培養基3～5倍質量的無菌水攪拌溶解得到菌種液；

(2)取步驟(1)所得的菌種液按1～2mL菌種液/100mL液體培養基的濃度接種到液體培養基上擴大發酵培養3～5天，培養溫度25～33℃，搖床轉速為180～200r/min，得發酵菌液，高壓滅菌并離心得到上清液；

(3)60～63℃減壓濃縮上清液至原體積的30％～40％，經截留分子量為6000～8000Da的透析袋去離子水透析處理，向透析后上清液中加入2～4倍體積乙醇溶液靜置沉降完全，再8000～10000r/min離心分離得粗糖產物，所用乙醇溶液的濃度為70～80wt％；

(4)將粗糖產物溶于水中，然后再加入乙醇溶液沉降、離心分離并干燥得到細胞外多糖。

3.根據權利要求2所述的具有脫色能力的細胞外多糖在廢水脫色上的應用，其特征在于，步驟(4)的乙醇溶液沉降過程如下：

第一，將粗糖產物溶于水中，加入濃度為60～65wt％乙醇溶液沉降得到第二粗糖產物；

第二，離心分離第二粗糖產物，干燥后直接置于純丙酮中50～60℃攪拌4～6小時，然后靜置、離心分離并用純丙酮洗滌、干燥得到第三粗糖產物；

第三，將第三粗糖產物溶于水中，減壓濃縮至體積為10％～20％，加入3～5倍體積的乙醇溶液迅速沉降、離心分離并90～105℃干燥得到細胞外多糖，乙醇溶液濃度為75～78wt％。

4.根據權利要求3所述的具有脫色能力的細胞外多糖在廢水脫色上的應用，其特征在于，第三步中加入的乙醇溶液的溫度為2～5℃，然后將加入乙醇溶液后得到的粗糖產物溶液與乙醇溶液的混合物置于-5～-10℃保持60～90min。

5.根據權利要求2所述的具有脫色能力的細胞外多糖在廢水脫色上的應用，其特征在于，1kg的液體培養基由以下組份制成：蛤肉湯25～55g、蛋白胨2.5～4g、磷酸氫二鉀0.5～1.5g、硫代硫酸鈉0.2～0.8g、檸檬酸鐵銨0.3～1g和葡萄糖15～25g，余量為陳化海水；固體培養基為向1kg的液體培養基中加入15～20g的瓊脂凝固制成的斜面培養基。