[發明專利]反硝化菌的保存方法

在審

• 申請號: 201811287939.5
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109321465A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 孟溪;高衛民;駱守鵬;陶文達;崔倩倩;陳志剛
• 申請（專利權）人: 中冶華天工程技術有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 北京中偉智信專利商標代理事務所 11325
• 代理人: 張岱

本發明公開了一種反硝化菌的保存方法。所述的方法包括下述步驟：(1)收集培養得到的反硝化菌菌體；(2)配置保藏液，其pH范圍在5.5?7之間，并維持溶解氧在4mg/L至飽和溶解氧范圍；(3)步驟(1)菌體與步驟(2)保藏液于保藏容器中混合并置于室溫環境保藏。與現有技術相比，本發明方法適宜于大量的反硝化菌的長期保藏，具有常溫保存效果好、存活率高、不含有毒有害物質、配方簡單，易于推廣等優點。

技術領域

本發明涉及一種菌劑保藏方法，具體涉及一種簡單有效，適合大批使用的保藏反硝化菌的方法。

背景技術

總氮濃度過高會引起水體富營養化，導致藻類過量繁殖，危害生態。2018年開始，國家對污水廠排放物中總氮實施控制，對于總氮去除有了更高的要求。環境中總氮的去除主要通過微生物作用，氨氮在硝化作用下氧化生成硝酸鹽，繼而被反硝化菌在厭氧條件下還原生成氮氣排出，從而降低水體中總氮濃度。

微生物菌種是重要的生物資源之一，具有特殊功能的微生物被分離培育后，需要保持其優良性狀不變或盡可能少變化，才能長期應用于環境治理中。微生物保藏的基本原理主要是根據其生化代謝特征，人為創造條件，使微生物代謝處于減緩或休眠狀態。好的菌劑保存方法不僅能夠保持菌種的優良性狀不退化，同時方法本身簡便經濟，可以在工業上推廣使用。

為了能夠有效地保藏微生物菌劑，需要針對菌種特性研究適宜的保藏方法。微生物的保藏可以通過不斷的供給其所需的碳氮源來延長細胞壽命，也可以設置抑制因素來減緩其代謝速率，延長保藏期。專利CN108117992A的反硝化菌劑保藏方法嚴格限定了采用對數期菌體進行保藏，并且添加大量的碳氮源來維持微生物菌體的代謝。這種方法雖然可以效果較好，但對于后期菌劑投加，會額外地向使用體系內帶進大量的有機物。對比本專利，則是采用盡可能簡單、無害的抑制因素來延長反硝化菌的代謝，增加保藏時間，使用起來更加簡單方便。

菌種保存有很多方法，可以通過微生物代謝抑制來延長菌劑的保存時間，但某些抑制劑具有一定的毒性。專利CN105543093A是通過添加亞硝酸鹽作為抑制劑用來保存氨氮降解菌，但亞硝酸鹽具有一定的致癌性，危害人類健康；專利CN102260630B和CN104357326B是分別通過添加硫酸銅或苯甲酸鈉以及山梨酸鉀用來菌劑保存，苯甲酸鈉和山梨酸鉀作為防腐劑，其本身就對微生物具有抑制作用，且作用具有光譜性，對菌劑發揮效果產生影響。低溫冷藏則是通過降低微生物代謝速度來實現菌劑保藏。專利CN105543093A通過將氨氮降解菌置于0～4℃進行保存；專利CN103103143B是將硝化菌置于-20～-70℃進行冷藏保存；專利CN106967634A將序批式活性污泥菌群置于2～5℃進行低溫保存。除了低溫，降低水分，通過干燥也可以進行菌劑的保存。專利CN103880168B就是通過冷凍干燥機進行好氧硝化顆粒污泥的保存。雖然干燥保存效果較好，但是需要特定干燥設備，且效率偏低，難以滿足大規模的生產需求。

微生物制劑和化學制劑最大的區別在于其本身為微生物菌體，具有一定的生物活性，所以其保質期長短，保藏前后菌劑的代謝活性的變化對污染治理效果具有很強的關聯性。

發明內容

針對上述缺陷，本發明的目的在于提供一種操作方便，無需低溫冷藏，不含有毒有害物質，適合較大量反硝化菌劑保存，菌體活性保持高，成本低廉的保存方法。

為實現上述目標，本發明反硝化菌的保存方法，包括以下步驟：

(1)收集培養得到的反硝化菌菌體；

(2)配置保藏液，其pH范圍在5.5-7之間，并維持溶解氧在4mg/L至飽和溶解氧范圍；

(3)步驟(1)菌體與步驟(2)保藏液于保藏容器中混合并置于室溫環境保藏。

優選的，所述的保藏液為磷酸鹽緩沖液、檸檬酸-NaOH-鹽酸緩沖液或KH₂PO₄-NaOH緩沖液。