[發明專利]變體硫酯酶及使用方法

在審

• 申請號: 201811287276.7
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN109456988A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: D·戴維斯
• 申請（專利權）人: 柯碧恩生物技術公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/16;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/13;C12P7/64;C12R1/89
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種編碼變體酰基-ACP硫酯酶的核酸分子，該核酸分子包括C-末端催化結構域和N-末端疏水結構域以及特異性結構域，其中該疏水結構域和/或該特異性結構域中的一個或多個與該催化結構域是異源的。

2.如權利要求1所述的核酸，其中該核酸編碼一種變體酰基-酰基載體蛋白(ACP)硫酯酶(TE)，該變體酰基-酰基載體蛋白(ACP)硫酯酶(TE)包括：

i)來自一種C10:0酰基-ACP偏好型TE的特異性結構域和來自一種C12:0酰基-ACP偏好型TE的催化結構域；

ii)來自一種C12:0酰基-ACP偏好型TE的特異性結構域和來自一種C14:0酰基-ACP偏好型TE的催化結構域；

iii)來自一種C14:0酰基-ACP偏好型TE的特異性結構域和來自一種C12:0酰基-ACP偏好型TE的催化結構域；

iv)來自一種C12:0酰基-ACP偏好型TE的特異性結構域和來自一種C10:0酰基-ACP偏好型TE的催化結構域；或

v)來自一種C10:0酰基-ACP偏好型TE的特異性結構域和來自一種C8:0酰基-ACP偏好型TE的催化結構域。

3.如權利要求1至2中任一項所述的核酸，其中該核酸編碼一種特異性結構域，該特異性結構域包括：

a)一種酰基-ACP-TE的對應于選自下組的氨基酸序列的氨基酸殘基，該組由以下各項組成：SEQ ID NO:43的氨基酸殘基125-163；SEQ ID NO:44的氨基酸殘基125-163；SEQ IDNO:45的氨基酸殘基152-190；SEQ ID NO:46的氨基酸殘基139-177；SEQ ID NO:47的氨基酸殘基117-155；SEQ ID NO:60的氨基酸殘基158-196；以及SEQ ID NO:61的氨基酸殘基156-194；

b)一種基序，該基序包括氨基酸序列SI(V/L/E)(A/T)(V/L)MN(H/Y/M/I)(L/M/V/F)QE(T/A)(A/S/T)(L/I)N(H/Q)(A/V/C)(K/E/R)(S/I/T/N/C)(V/L/A/T/I/N)G(L/I)(L/S/M)(G/L/D/N/E)(D/N/E)G(F/L)G(T/E/R/S/A)(T/S)(L/P/R)(E/G)M(S/Y/F/C/T)(K/R/L)(R/K/N/M)(D/G/N)L(M/I/F)和/或

c)與選自下組的氨基酸序列至少60％的序列一致性，該組由以下各項組成：SEQ IDNO:43的氨基酸殘基125-163；SEQ ID NO:44的氨基酸殘基125-163；SEQ ID NO:45的氨基酸殘基152-190；SEQ ID NO:46的氨基酸殘基139-177；SEQ ID NO:47的氨基酸殘基117-155；SEQ ID NO:60的氨基酸殘基158-196；以及SEQ ID NO:61的氨基酸殘基156-194。

4.如權利要求1至3中任一項所述的核酸，其中該核酸編碼一種特異性結構域，該特異性結構域促進具有改變的脂肪酸譜的甘油三酯的生產并且包括：

a)一種基序，該基序包括氨基酸序列SI(V/L/E)(A/T)(V/L)MN(H/Y/M/I)(L/M/V/F)QE(T/A)(A/S/T)(L/I)N(H/Q)(A/V/C)(K/E/R)(S/I/T/N/C)TGI(L/S/M)L(D/N/E)G(F/L)G(T/E/R/S/A)(T/S)L(E/G)M(S/Y/F/C/T)K(R/K/N/M)(D/G/N)L(M/I/F)WV(V/L)I(K/R)(M/T)(Q/H)(I/V)K；和/或

b)與SEQ ID NO:61的氨基酸殘基156-203至少60％的序列一致性，其中在位置166處的氨基酸殘基是谷氨酰胺；在位置175處的氨基酸殘基是蘇氨酸；在位置177處的氨基酸殘基是異亮氨酸；在位置179處的氨基酸殘基是亮氨酸；在位置186處的氨基酸殘基是亮氨酸；在位置190處的氨基酸殘基是賴氨酸；在位置198處的氨基酸是異亮氨酸并且在位置203處的氨基酸是賴氨酸；和/或

c)SEQ ID NO:61。