[發(fā)明專利]一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811285354.X
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109337999A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 裴卓強;沈啟海;寧濤;盧星邑
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏泰金種業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 北京弘權(quán)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

1.一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

分別提取甜瓜葉片母本材料的基因組DNA和甜瓜葉片父本材料的基因組DNA；

以所述甜瓜葉片母本材料的基因組DNA和所述甜瓜葉片父本材料的基因組DNA為模板，采用公布的SSR分子標記進行PCR擴增，篩選出上游引物和下游引物；

以雜交甜瓜單株的基因組DNA為模板，加入所述上游引物和所述下游引物，進行PCR擴增，得到擴增產(chǎn)物；

將所述擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳，得到凝膠擴增產(chǎn)物；

將所述凝膠擴增產(chǎn)物進行EB染色后，得到染色擴增產(chǎn)物；

將所述染色擴增產(chǎn)物置于凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)成像，統(tǒng)計帶型結(jié)果；

根據(jù)所述帶型結(jié)果計算所述甜瓜雜交種子的純度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，采用改良熱堿法分別提取所述甜瓜葉片母本材料的基因組DNA和所述甜瓜葉片父本材料的基因組DNA，所述改良熱堿法包括：

將所述甜瓜葉片剪碎置于離心管中，向離心管中加入NaOH，將離心管在沸水中放置預(yù)定時間，向離心管中加HCl中和，將離心管放置于Tris-HCl進行沸水浴，得到所述甜瓜葉片母本材料的基因組DNA和所述甜瓜葉片父本材料的基因組DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列為：5'-AATCACTGCTTCCAAATGGG-3'，所述下游引物的核苷酸序列為：5'-GATCGGATTTCTTTGTCGGA-3'。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述PCR擴增為多態(tài)性擴增。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述進行PCR擴增時，PCR反應(yīng)體系包括：10μL的2×taq mix，0.4μL的所述上游引物，0.4μL的所述下游引物，2μL的所述甜瓜葉片母本材料的基因組DNA和所述甜瓜葉片父本材料的基因組DNA混合物，加水至20μL；

PCR反應(yīng)過程包括，單次反應(yīng)過程94℃溫度條件下反應(yīng)5min后降溫，94℃溫度條件下反應(yīng)30s后降至60℃條件下反應(yīng)30s后，升溫至72℃條件下反應(yīng)15s；

循環(huán)所述單次反應(yīng)過程33次后，72℃溫度條件下反應(yīng)10min，最后溫度4℃條件下保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于SSR標記法的甜瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述將所述擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳采用1.5％瓊脂糖凝膠，電壓設(shè)置為160V，電泳時間設(shè)置為15min。