[發明專利]一種雙特異性抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201811283193.0
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN111116753A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 秦金燕;鄭琛;王言超;武翔;龐春滔
• 申請（專利權）人: 上海泰因生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K1/10
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 封喜彥;胡晶

本發明公開了一種雙特異性抗體的制備方法。本發明使用化學偶聯的方法將兩種不同的單克隆抗體CD3單抗、CLL1單抗通過化學偶聯劑連接，最終合成雙特異性抗體。該方法能有效地將CD3單抗與CLL1單抗制成CD3?CLL1雙抗，且合成率在95％以上。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，特別涉及CD3和CLL1單克隆抗體制備雙特異性抗體的方法。

背景技術

雙特異性抗體(bispecific antibody，BsAb)是新型的第二代抗體，擁有兩種特異性抗原結合位點，可以同時與靶細胞和功能細胞(一般為T細胞)相互作用，進而增強對靶細胞的殺傷作用，是一種療效遠超普通抗體的新型靶向藥物。BsAb以三功能抗體(Triomab)和雙特異性T細胞銜接器(Bispeific T cell Engager，BiTE)為代表，與普通抗體相比具備更強特異性、引導T細胞殺傷腫瘤和降低脫靶毒性等顯著優勢，目前已經在腫瘤和炎癥等相關疾病中應用。數據顯示，BsAb殺傷腫瘤效果是普通抗體的100-1,000倍；用量最低可降為普通抗體的1/2,000，在藥效和價格上比一般抗體更具競爭優勢。

CD3分子表達在人全部T細胞上，是鑒定T細胞的重要標記。CD3分了是由γ、δ、ε和η等幾種多肽鏈組成，并與T細胞識別抗原受體形成TCR/CD3復合物。其中TCR特異性識別抗原，而TCR與抗原結合后所產生的活化信號是由CD3分子傳遞到T細胞內部。

CLL1分子存在于外周血和骨髓的髓系細胞和大部分AML白血病細胞，同時也表達于AML大部分的CD34+CD38-干細胞上，而在正常人CD34+CD38-干細胞上不表達。白血病細胞表面抗原CLL-1的表達有助于區分髓系白血病和淋巴系列白血病。

雙特異性抗體在自然狀態下不存在，只能通過人工制備。常見方法有化學偶聯法、雙雜交瘤法、基因工程法等。但是雙雜交瘤法會產生多種不需要的輕、重鏈配對產物導致雙特異性抗體產量低且難以純化；基因工程法得到的蛋白質則包含有一些外來的肽序列象鏈或者異性二聚作用形成的區域在臨床應用時可能會引發免疫反應。而單克隆抗體技術已十分成熟，運用化學偶聯法操作簡單快捷，將兩個完整IgG或兩個抗體片段使用偶聯劑合成，經純化便可得到BsAb。

目前，國內有關抗CLL1與抗CD3雙特異性抗體的制備研究尚無，為此我們提供了一種偶聯劑將其二者連接，并對還原劑及偶聯劑用量優化使其更具有效性。該方法可快速、大量制備雙特異性抗體。

發明內容

本發明提供一種通過使用特定還原劑和偶聯劑制備CD3-CLL1雙特異性抗體的方法。

本發明的技術方案如下：

一種雙特異性抗體制備方法，使用化學偶聯的方法將兩種單克隆抗體通過化學偶聯劑連接合成雙特異性抗體，所述單克隆抗體為CD3和CLL1。

本發明使用化學偶聯的方法將兩種單克隆抗體通過化學偶聯劑連接合成雙特異性抗體。該方法能有效地將CD3單抗與CLL1單抗制成CD3-CLL1雙特異性抗體。

該方法首先將CD3單抗與CLL1單抗分別采用還原劑處理，然后將兩者混合，并在同一個反應體系中通過偶聯劑連接。

在優選實施例中，所采用的還原劑為所述還原劑為：三(2-羧乙基)膦(Tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP))。

在優選實施例中，所采用的偶聯劑為二溴戊酮或二硫代酰基苯甲酸。

此外，本發明在還原劑和偶聯劑的使用量上進行優化，得到較高純度的雙抗，其方法具有專屬性。