[發(fā)明專利]一種“熒光-穩(wěn)定同位素”雙模態(tài)對三硝基甲苯的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811264443.6
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109765203B
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 呂弋;胡建煜;劉睿
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可以檢測三硝基甲苯（TNT）的分析方法，其特征在于：

（1）所述分析方法包括聚胸腺嘧啶-核酸適配體探針，即AptTNT-PolyT，和熒光檢測和穩(wěn)定同位素檢測；

（2）所述分析方法AptTNT-PolyT探針序列為5’-TTT TTT TTT TTT (……) TTTTTTTTTTTT CTC GGT TGT GGT GTT AGT TGG TAC TGC GCC TCC GTC GTC CTG TCA CTC TGCTGC AGC GCG CGA GCC ATA CAC TAT ACA CCT TAA AAT ATA GTT GCC TAG G-3’；

（3）所述分析方法AptTNT-PolyT探針序列中，5’端TTT TTT TTT TTT (……) TTTTTTTTTTTT序列為聚胸腺嘧啶核酸序列，在抗壞血酸和硫酸銅的作用下快速原位合成銅納米粒子；

（4）所述分析方法AptTNT-PolyT探針序列中，3’端CTC GGT TGT GGT GTT AGT TGG TACTGC GCC TCC GTC GTC CTG TCA CTC TGC TGC AGC GCG CGA GCC ATA CAC TAT ACA CCTTAA AAT ATA GTT GCC TAG G序列為核酸適配體序列，在PBS溶液中和待測TNT分子特異性結合生成三明治結構，形成端基保護，不被ExoⅠ酶切割；

（5）該分析方法包括：a.熒光光譜傳感分析，即TNT和AptTNT-PolyT探針反應形成端基保護后，可以不被ExoⅠ酶切割，在抗壞血酸和硫酸銅作用下快速原位合成銅納米粒子，利用銅納米粒子特異性熒光光譜，記錄下不同濃度的發(fā)射光信號，采用線性回歸分析，即可對待測TNT樣品進行熒光定量檢測；b.穩(wěn)定同位素檢測，即TNT和AptTNT-PolyT探針反應形成端基保護后，可以不被ExoⅠ酶切割，在抗壞血酸和硫酸銅作用下快速原位合成銅納米粒子，在硝酸消解后轉換成大量銅離子，利用電感耦合等離子體質譜儀對銅元素穩(wěn)定同位素進行高靈敏定量，記錄下不同濃度的同位素質譜強度信號，采用線性回歸分析，即可對TNT樣品進行高靈敏穩(wěn)定檢測。

2.根據(jù)權利要求1所述的分析方法，其特征在于：

（1）所述分析方法中在熒光檢測模式下TNT進樣量濃度范圍為1-100nM，在穩(wěn)定同位素檢測模式下TNT進樣量濃度范圍為0.25-20nM；

（2）所述分析方法中TNT與AptTNT-PolyT反應所用緩沖溶液為PBS溶液，所述PBS溶液由8.1mM Na₂HPO₃, 1.9mM NaH₂PO₃,145mM NaCl組成，且pH=7.2-7.4，時間為60-90min,溫度為20-25℃；

（3）所述分析方法中AptTNT-PolyT與ExoⅠ反應所用緩沖溶液為NEBuffer 3，時間為90-120min，溫度為37℃；

（4）所述分析方法中AptTNT-PolyT與抗壞血酸和硫酸銅的反應緩沖溶液為MOPS； 所述MOPS溶液由10 mM MOPS, 2mM MgCl2, 150mM NaCl組成，且pH=7.6，溫度為20-25℃，時間為3-5min；

（5）所述分析方法中在熒光檢測模式和穩(wěn)定同位素檢測模式下對TNT的檢出限可達到0.17ppb和0.30ppt ，且單位分別為ng mL^-1和pg mL^-1。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的分析方法，其特征在于：在熒光檢測模式下利用熒光光譜儀進行檢測，在360nm波長的光激發(fā)下，CuNPs發(fā)射出660nm的紅色熒光；在穩(wěn)定同位素檢測模式下利用ICPMS進行檢測，以⁶³Cu同位素作為檢測對象進行高靈敏定量分析。