[發明專利]一種生物素標記聚合物納米顆粒模擬抗體及其在Bt蛋白酶聯免疫檢測中的應用

有效

• 申請號: 201811257972.3
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109517117B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 劉名茗;胡森華;陳雅露;禹云莉;李雨欣;程巧連;陳秀華;劉凡
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C08F289/00
• 分類號: C08F289/00;C08F220/56;C08F222/38;C08F220/54;C08F220/14;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

本發明公開了一種生物素標記聚合物納米顆粒模擬抗體，它是模擬Bt Cry1Ac蛋白與煙草天蛾中腸刷狀緣膜囊受體鈣粘蛋白Bt?R1之間的分子識別機制，以人工合成的丙烯酰胺?多肽?酰胺單體與其它共存單體以及生物素標記單體反應后得到的聚合物納米顆粒，所述多肽包含有氨基酸序列NITIHITDTNNK，所述共存單體為丙烯酰胺類和/或丙烯酸酯類化合物。本發明還公開了基于生物素標記聚合物納米顆粒模擬抗體建立的Bt蛋白酶聯免疫檢測試劑盒和檢測方法，該方法檢測的Bt蛋白種類更多，應用范圍更廣，成本更低，工作量更小。同時還保留了傳統的基于生物抗體的酶聯免疫吸附法特異性好、準確度高、操作簡便的優點，克服了天然抗體制備困難、成本高、對環境耐受性差、易失活、保存和反應條件嚴苛等缺點。

技術領域

本發明屬于生物分析領域，涉及一種生物素標記聚合物納米顆粒模擬抗體及其制備方法，以及基于生物素標記聚合物納米顆粒模擬抗體建立的Bt蛋白酶聯免疫分析方法。

背景技術

Bt是Bacillus thuringiensis的簡稱，其中文名稱為蘇云金芽孢桿菌。Bt是一種好氧型革蘭氏陽性細菌、呈桿狀、內生芽孢，是一種重要的殺蟲細菌。Bt菌體進入穩定生長期，在芽孢周圍形成菱形或者雙錐形的伴孢晶體蛋白(Parasporal crystal protein)，通常被稱為殺蟲晶體蛋白(Insecticidal crystal protein，ICP)或δ-內毒素或蘇云金芽胞桿菌毒蛋白(Bt toxic protein)。Bt蛋白對許多重要的農業害蟲，包括鱗翅目、鞘翅目、雙翅目、膜翅目、瞞類和線蟲等具有高特異的殺蟲活性，而對人畜和非靶標昆蟲，如天敵昆蟲等安全無害，因此被廣泛用于農業害蟲的防治，其防治方法主要包括噴灑Bt生物殺蟲劑或者種植轉Bt基因作物。利用基因工程技術將Bt基因轉入農作物體內，培育出釋放Bt蛋白的各種抗蟲轉基因作物是迄今為止研究最為熱門的農業害蟲防治技術。目前，已成功將Bt蛋白基因導入煙草、棉花、玉米、水稻、甘蔗、小麥、大豆、馬鈴薯、番茄、甘藍、楊樹和落葉松等60多種植物中。轉基因技術的快速發展和轉基因作物的大范圍推廣，在帶來巨大經濟效益的同時，也帶來了諸如外源基因漂移、靶標昆蟲抗性演化、生物多樣性變化以及土壤生態系統影響等諸多環境及生態問題。研究Bt蛋白在環境及生物介質中的殘留及遷移問題對轉Bt基因作物的生態環境風險評價顯得尤為重要，而這些工作又離不開準確、快速、高效、特異性的樣品前處理以及分析檢測方法。因此，需要建立一種簡便、快速、準確、成本低廉的方法用于環境及生物樣品中Bt蛋白的檢測，以解決公眾高度關注的水、土壤、植物葉片、作物果實及種子等環境及生物樣品中Bt蛋白的殘留、富集及遷移問題。