[發(fā)明專利]一種測(cè)定北芪菇中黃芪苷含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811249679.2
• 申請(qǐng)日: 2018-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN109444319B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊衛(wèi)民;左崇香;趙青紅;秦永其;杜京旗;張利軍;閆艷華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 呂梁學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N30/90
• 分類號(hào): G01N30/90;G01N1/28
• 代理公司: 太原科衛(wèi)專利事務(wù)所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

本發(fā)明公開了一種測(cè)定北芪菇中黃芪苷含量的方法，涉及北芪菇中活性物質(zhì)提取和含量測(cè)定領(lǐng)域，以北芪菇為原料，以乙醇為提取劑，料液比為1:25，經(jīng)微波超聲波輔助獲得黃芪苷粗提取液，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的體積比13:7:2:2為展開劑，經(jīng)薄層層析展開分離純化，采用光譜掃描確定的測(cè)定波長與參比波長，再用反射掃描法測(cè)定各個(gè)斑點(diǎn)的吸收峰峰面積積分值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸收峰峰面積積分值與量的線性關(guān)系，用外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量，雙波長薄層掃描法使目標(biāo)物質(zhì)充分溶解于提取劑中，掃描法可基本消除鋪板不均產(chǎn)生的誤差，掃描基線穩(wěn)定，不造成目標(biāo)物質(zhì)的損失，且操作簡單、用時(shí)短，具有提取效率高，可定性分析準(zhǔn)確性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及北芪菇中活性物質(zhì)的提取與含量測(cè)定領(lǐng)域，具體為一種測(cè)定北芪菇中黃芪苷含量的方法。

背景技術(shù)

北芪菇，擔(dān)子菌門下傘菌目側(cè)耳屬平菇，將正北芪、多種中草藥、農(nóng)作物副產(chǎn)品作培養(yǎng)料，采用科學(xué)的配方和特殊的工藝多年培育而成的新型側(cè)耳屬平菇，是山西渾源富硒地區(qū)開發(fā)的新型食用菌。根據(jù)生物富集作用，北芪菇內(nèi)含渾源黃芪的藥理成分，在生長發(fā)育過程中對(duì)黃芪苷有一定程度的富集。北芪菇中含有多種人體必需的氨基酸、多糖蛋白、抗生素、牛黃酸、菌糖、多種酶、維生素以及硒元素，是全能營養(yǎng)型的食用菌，其營養(yǎng)成份遠(yuǎn)超于普通平菇，含有較高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值。北芪菇具有較強(qiáng)的生物轉(zhuǎn)化作用，其重要的代謝產(chǎn)物，如蛋白多糖、抗生素、微量牛黃酸有抗腫瘤、抗菌消炎、降低血壓和防治腦血管障礙等作用，菌多糖和甘露糖有益于調(diào)理胃腸作用，以及含有幫助消化的各種酶等。在補(bǔ)氣固表、潤膚、脫毒排膿、有強(qiáng)身健體、保護(hù)肝臟等有較為顯著的作用，尤其是在治愈銀霄病和其它瘙癢性皮膚病有特殊的功效。另外，北芪菇是一種能產(chǎn)生新型氨基酸的微生物，其豐富的賴氨酸（1.19g/100g）和硒（0.54ppm/100g）可能與吡咯賴氨酸和L-硒代半胱氨酸或L-硒-甲基硒代半胱氨酸的生物合成存在著密切的關(guān)系，有望在抑制腫瘤、抗氧化、輔助治療心血管疾病、解毒排毒等方面進(jìn)行開發(fā)。

近年我國對(duì)不同植物中的黃芪苷進(jìn)行了各方面的研究，相繼報(bào)道了黃芪苷有免疫調(diào)節(jié)、抗炎，降壓，鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛，保肝護(hù)心，清除多種自由基等多方面的藥理作用。關(guān)于黃芪中黃芪苷的提取及含量測(cè)定早有報(bào)道，但對(duì)產(chǎn)于山西渾源縣北芪菇中黃芪苷的含量少有報(bào)道，如今北芪菇中黃芪苷的研究備受人們重視，有關(guān)黃芪苷的研究變成了科學(xué)界的熱點(diǎn)。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，黃芪苷的開發(fā)研究和應(yīng)用范圍會(huì)更廣，開發(fā)前景會(huì)更好，從而促進(jìn)醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展。

北芪菇中的黃芪苷以黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ、黃芪甲苷為主。黃芪皂苷在抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能、保肝、抗病毒和對(duì)心腦血管等多方面具有顯著作用。有關(guān)黃芪皂苷的鑒別通常采用相繼報(bào)道了水浸提法，堿水提取法，回流法、CO₂超臨界流體萃取法等多種方法。黃芪皂苷的含量測(cè)定曾嘗試采用高效液相一紫外檢測(cè)器檢測(cè)，但由于黃芪皂苷在紫外區(qū)僅有微弱的吸收，溶劑噪音對(duì)結(jié)果有較大影響，靈敏度低，測(cè)定誤差大。

黃芪甲苷為環(huán)阿爾廷型三萜皂苷類化合物，生物活性高，是黃芪的主要藥理成份，是黃芪及含黃芪制劑的重要鑒定指標(biāo)。黃芪甲苷對(duì)人體擁有非常高的藥理作用，其在器官保護(hù)（尤其是肝臟、肺、心肌、腎臟、腦等器官）、免疫調(diào)節(jié)、抗細(xì)胞凋亡、抗炎抗病毒、抗糖尿病、清除自由基、抗衰老等方面具有廣泛的藥理作用。黃芪甲苷的常見提取方法主要有水浸提法，堿水提取法，醇提法、煎煮法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、索式提取法、超臨界CO₂萃取法及加速溶劑萃取法，黃芪甲苷含量測(cè)定方法主要有分光光度法、高效液相色譜法、熒光、紫外分光光度法等。但是上述方法操作步驟繁瑣，測(cè)定時(shí)間長，例如索氏回流提取需要堿洗及大孔樹脂富集過程，洗脫富集復(fù)雜，不易操作，同時(shí)含量測(cè)定過程中由于黃芪甲苷僅在近紫外區(qū)（200nm左右）有微弱吸收，屬于末端吸收，因?yàn)椴ㄩL越長，噪音就越大，靈敏度也隨之降低。

在大多數(shù)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室，薄層色譜（TLC）是一種常用、可靠的方法，但傳統(tǒng)的可見技術(shù)不提供薄層色譜斑點(diǎn)的結(jié)構(gòu)信息。質(zhì)譜法是一種鑒定這些斑點(diǎn)的強(qiáng)大技術(shù)，然而傳統(tǒng)的從薄層板上手動(dòng)刮點(diǎn)、萃取、重組，進(jìn)而在質(zhì)譜上注射分析獲取質(zhì)譜圖的過程耗時(shí)耗力。