[發(fā)明專(zhuān)利]一種測(cè)定北芪菇中黃芪苷含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811249679.2
• 申請(qǐng)日: 2018-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109444319B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊衛(wèi)民;左崇香;趙青紅;秦永其;杜京旗;張利軍;閆艷華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 呂梁學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/90
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/90;G01N1/28
• 代理公司: 太原科衛(wèi)專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

1.一種測(cè)定北芪菇中黃芪苷含量的方法，其特征在于，以北芪菇為原料，微波超聲波萃取儀輔助處理后，采用萃取法對(duì)黃芪苷進(jìn)行粗提取，經(jīng)薄層層析法分離純化后，采用雙波長(zhǎng)薄層掃描法測(cè)定北芪菇中黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量，其中，以70%的乙醇為提取劑，料液比為1:25，經(jīng)微波超聲波輔助萃取儀輔助處理后獲得黃芪苷粗提取液，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的體積比13:7:2:2為展開(kāi)劑，經(jīng)薄層層析展開(kāi)分離純化黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，采用光譜掃描確定黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)，再用反射掃描法測(cè)定各個(gè)斑點(diǎn)的吸收峰峰面積積分值，根據(jù)黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)品吸收峰峰面積積分值與標(biāo)準(zhǔn)品量的線性關(guān)系，用外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定其含量，具體過(guò)程如下：

步驟a，以北芪菇粉為原料，分別加入70%乙醇，料液比為1:25，50℃下振蕩浸提，超聲波微波萃取儀分三階段提取，每階段5min，共15min，超聲波頻率為50KHz，電機(jī)轉(zhuǎn)速900r/min，提取液于4000r/min下離心10min，上清液過(guò)濾、濃縮，石油醚去雜后，用飽和正丁醇萃取，合并上層溶液、濃縮至無(wú)液體溢出時(shí)用甲醇將其定容備用；

步驟b，將黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)品加于色譜純的甲醇中，超聲條件下充分溶解后制得1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于2～4℃的冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟c，將層析板加熱活化，用微量進(jìn)樣器分別吸取北芪菇、正北芪供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液25μL，依次點(diǎn)樣供試液3-4μL，標(biāo)準(zhǔn)品溶液2μL、3μL、6μL，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的體積比13:7:2:2靜置過(guò)夜的下相為供試品展開(kāi)劑，密封后，預(yù)飽和20min，放入層析缸中上行展開(kāi)，待展開(kāi)前沿距層析板頂端1cm處時(shí)，取出層析板晾干，均勻噴10%的硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至顯色清晰為止，用玻璃板覆蓋，四周膠布固定，紫外365nm下檢視，薄層色譜成像系統(tǒng)拍照，并標(biāo)記；

步驟d，將層析板放入薄層色譜掃描儀中，確定背景及各個(gè)黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ斑點(diǎn)的橫、縱坐標(biāo)，采用光譜掃描確定黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的測(cè)定波長(zhǎng)與參比波長(zhǎng)，再用反射掃描法測(cè)定各個(gè)斑點(diǎn)的吸收峰峰面積積分值，根據(jù)黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ吸收峰峰面積積分值與標(biāo)準(zhǔn)品量的線性關(guān)系，用外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定其含量。