[發(fā)明專利]通過引物組合物用于進行雷米普利個體化用藥指導的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811242502.X
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN111088345A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬慶偉;鐘逾
• 申請（專利權(quán)）人: 北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供一種利用不同單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點具有不同分子量的延伸引物，從而通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Mass Array matrix?assisted laser desorption ionisation?time?of?flight mass spectrometry，MALDI?TOF MS)同時檢測多個位點，最終獲得通過引物組合物進行質(zhì)譜法判別雷米普利個體化用藥的方法，該方法包括：根據(jù)待測的多個目的SNP位點分別設(shè)計多重擴增引物和延伸引物；配制多重擴增引物反應(yīng)體系和延伸引物反應(yīng)體系；在反應(yīng)體系中，用多套引物同時分別對多個目的SNP位點進行擴增和單堿基延伸反應(yīng)；將單堿基延伸反應(yīng)后的產(chǎn)物進行飛行時間質(zhì)譜分析，根據(jù)質(zhì)譜峰所代表的不同分子量延伸引物的產(chǎn)物，鑒定不同藥物代謝相關(guān)SNP的基因型，指導降高血壓藥物雷米普利的個體化用藥。本發(fā)明能同時檢測2個雷米普利藥物代謝相關(guān)的SNP位點，并具有成本低、無需合成探針、耗時短、結(jié)果分析簡單便捷、應(yīng)用領(lǐng)域極其廣泛的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學檢測領(lǐng)域，涉及一種利用質(zhì)譜特征峰圖檢測多重PCR單堿基延伸產(chǎn)物的方法及其產(chǎn)品，該方法可以在兩個多重PCR反應(yīng)中同時檢測多個PCR單堿基延伸擴增的寡核苷酸產(chǎn)物。更具體的說，該方法利用不同目的寡核苷酸片段在質(zhì)譜分型過程中生成的不同的時間飛行質(zhì)譜特征峰圖，針對多個目的SNP位點同時進行檢測，指導降高血壓藥物雷米普利的個體化用藥。

背景技術(shù)

人類的遺傳信息儲存在基因組中，2002年國際合作項目人類基因組計劃的最終完成，繪制出了人類基因組結(jié)構(gòu)的精細圖，為相關(guān)研究提供了參考序列。人類基因組序列共由30億個堿基組成，大量研究表明，人群中1％的遺傳差異大約占基因組序列的0.1％左右，即大約300萬個堿基的差異，在人群中超過1％的變異頻率。這些差異極有可能是造成兩個人之間個體差異的遺傳因素。發(fā)現(xiàn)這些位點，可廣泛地應(yīng)用于遺傳標記的研究、評估個體遺傳關(guān)系、評估物種進化等研究領(lǐng)域。

在人類基因組中，約90％的差異是以單個核苷酸的形式體現(xiàn)出來的，這樣的差異位點被稱作單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有兩個顯著的特點：一是數(shù)目眾多，據(jù)估計人類基因組中的SNP數(shù)目約在1100萬左右，目前NCBI dbSNP數(shù)據(jù)庫中已收錄來源于人類基因組的SNP達1083萬，其中經(jīng)過確認的為644萬(截至2007年8月22日)，如此大量的SNP方便了選擇合適的位點進行疾病研究，也使得絕大多數(shù)基因組區(qū)域在SNP覆蓋范圍內(nèi)；另外一個特點是SNP位點大多數(shù)為雙態(tài)，即在一個位點上僅有兩種表現(xiàn)形式(基因型)，這樣很容易就能設(shè)計出高通量自動化的檢測方法。正因為這兩個特點，使得SNP位點越來越受到研究者的青睞，被譽為是繼限制性片段長度多態(tài)性(RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串聯(lián)重復序列(short tandem repeat，STR)之后的第三代分子標記物。人類基因組計劃完成前后，基因組學研究的重點逐漸轉(zhuǎn)向SNP領(lǐng)域，因此，SNP在遺傳標記學、生物群體遺傳學、生物分類學、遺傳育種學、物種或人類進化學、法科學、藥物基因組學等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。

心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負擔。我國心血管病患病率處于持續(xù)上升階段。高血壓是最常見的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險因素。高血壓病人全球約有6.9億人，發(fā)病率高達31.3％。流行病學研究顯示，血壓水平與心血管病發(fā)病率呈線性相關(guān)；血壓升高是腦卒中和冠心病發(fā)病的獨立危險因素。高血壓是引起危及生命的心、腦血管病如心肌梗死、腦卒中、腎臟功能不全等的主要原因。因此，有效控制血壓對防止高血壓患者心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生具有重大的臨床意義。