[發(fā)明專利]一種骨鈣素檢測試劑的校準品及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811241085.7
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN109490550B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 汪一名;李娟;趙妍
• 申請（專利權(quán)）人: 迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N1/28
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 張偉

本發(fā)明屬于醫(yī)學體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種骨鈣素檢測試劑的校準品及其制備方法。本發(fā)明制備的骨鈣素檢測試劑的校準品，由于加入賦形劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、防腐劑組成的復合保護物質(zhì)，使得校準品穩(wěn)定性好，在室溫條件下可穩(wěn)定1個月，在?20℃下可穩(wěn)定1年，儲存有效期長，所述制備方法可溯源至國際或國內(nèi)參考物質(zhì)，確保臨床檢驗結(jié)果的準確性。本發(fā)明提供的穩(wěn)定的骨鈣素檢測試劑的校準品適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，解決校準品保存不穩(wěn)定的困難，同時降低了生產(chǎn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種骨鈣素檢測試劑的校準品及其制備方法。

背景技術(shù)

骨鈣素是骨基質(zhì)中最重要的一種特異性非膠原蛋白，由骨和牙齒中的成骨細胞合成并分泌，其與骨鈣的結(jié)合作用依賴于維生素K。骨鈣素分子含49個氨基酸，分子量約為5800D。在骨合成中，成骨細胞產(chǎn)生骨鈣素，此過程依賴于維生素K，同時維生素D3有促進產(chǎn)生骨鈣素的作用。使用維生素K拮抗劑，可使此蛋白在骨中的含量減少，但并不影響其脯氨酸的含量，也不影響骨的機械強度。骨鈣素產(chǎn)生后一部分進入骨基質(zhì)，另一部分釋放進入外周血。因此，血清(血漿)中骨鈣素的含量與各種骨代謝紊亂中骨轉(zhuǎn)化率有關(guān)。完整的骨鈣素包含49個氨基酸，1-43氨基酸的片段為N-中端骨鈣素(N-MID)。完整的骨鈣素在外周血中不穩(wěn)定，羧基端的43-44間的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下來的N-MID則穩(wěn)定的多。因此，測定血清(血漿)中的穩(wěn)定N-MID，從而確保檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。

為了實現(xiàn)這種方法，需要與之相配套的校準品。目前制備校準品大多采用血清基質(zhì)真空冷凍干燥所得。但血清基質(zhì)仍存在一些問題。主要是其成份復雜、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂蛋白類等物質(zhì)尚未充分認識，對實驗會產(chǎn)生一定的影響；其次血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間會存在一定差異，而且血清保存期也需要被考慮，容易引起細菌等污染，導致保質(zhì)期縮短，因此，要保證每批血清的一致性較為困難，從而使實驗的標準化受到一定的限制；而且進口血清的價格相對較高，因此選擇血清作為基質(zhì)成分，需要考慮的因素非常多，對實際應用產(chǎn)生了很大的限制。另一方面血清容易被細菌污染，因此會為校準品的效期穩(wěn)定性帶來一定的風險，高品質(zhì)的血清價格也相對較高，會增加最終校準品的成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)問題，提供一種骨鈣素檢測試劑的校準品及其制備方法，本發(fā)明以緩沖液為基質(zhì)，通過對緩沖液種類及凍干保護劑的篩選，制備出了穩(wěn)定性好、準確度高的骨鈣素檢測試劑校準品。本發(fā)明工藝簡單、緩沖液基質(zhì)替代了價格昂貴的血清基質(zhì)大大降低了生產(chǎn)成本。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：

一種骨鈣素檢測試劑的校準品的制備方法，包括以下步驟：

(a)、配制緩沖液；

(b)、將凍干保護劑和不同濃度的降鈣素，加入步驟(a)獲得的緩沖液中；

(c)、將步驟(b)中獲得的緩沖液混合物進行冷凍干燥，由此獲得所述校準品；

所述緩沖液為磷酸氫二鈉-檸檬酸、MOPSO和巴比妥那-鹽酸緩沖液中的一種或幾種；

所述凍干保護劑是由氨基酸類保護劑、蛋白類保護劑、糖類保護劑、多元醇、表面活性劑及防腐劑組成的混合物。

在上述技術(shù)方案中，所述緩沖液為pH為6.5-7.5、濃度為10mM-20mM的MOPSO緩沖液。

在上述技術(shù)方案中，所述緩沖液為pH為7.5、濃度為10mM的MOPSO緩沖液。

在上述技術(shù)方案中，

所述氨基酸類保護劑為甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和組氨酸中的一種或幾種的混合物；

所述蛋白類保護劑為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一種或幾種的混合物；