[發明專利]用于胃癌診斷、化療和預后檢測的分子標記物及試劑盒

在審

• 申請號: 201811230979.6
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號: CN109576364A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 黃家強;張鷺鷺;林舒曄;王曉月;田榮孟
• 申請（專利權）人: 北京交通大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京市商泰律師事務所 11255
• 代理人: 鄒芳德

本發明提供了一種用于胃癌早期診斷、化療和預后檢測的分子標記物及其在制備胃癌診斷、化療與預后檢測的制劑中的應用和試劑盒，屬于分子診斷技術領域。該分子標記物為位于MZF1基因內的一段DNA序列，該DNA序列的核苷酸序列至少包含一個甲基化位點的修飾，具有敏感性強、特異性高的特點。MZF1基因序列的DNA甲基化和與其相關組蛋白修飾可作為胃癌發展的早期診斷、化療與預后檢測的分子標志物和藥物作用靶點。基于檢測MZF1基因內DNA序列甲基化的試劑盒可以特異地檢測MZF1基因相關的DNA甲基化水平，還能夠對MZF1基因相關的DNA甲基化水平進行特異、定量檢測，檢測結果可以為胃癌患者病情及個體化用藥監測、腫瘤早期診斷，也為患者對藥物治療的預后提供了評價方法。

技術領域

本發明涉及分子診斷技術領域，具體涉及一種用于胃癌早期診斷、化療和預后檢測的分子標記物及其在制備胃癌診斷、化療與預后檢測的制劑中的應用和試劑盒。

背景技術

胃癌(Gastric cancer,GC)是我國最常見的高發性腫瘤之一，其致死率在世界及我國居各類惡性腫瘤的前列。由于缺乏早期發現的有效檢測手段，在就診患者中，多數處于中晚期，已失去手術機會或要借助新輔助化療后再實施手術治療。對于中晚期的患者的臨床治療多以化療為主，這樣的治療方式雖然能在一定程度上可抑制腫瘤的惡化，但化療的毒性作用導致的不良反應和痛苦，以及后期病人對化療藥的耐受，帶來了一系列的生物學和臨床問題。因此，研究腫瘤化療耐藥的分子通路機制，從而鑒別能夠抑制腫瘤細胞增殖、提高化療敏感性的分子靶標，為腫瘤的精準診斷與個體化治療提供新的思路，具有重要的臨床意義和科學價值。

胃癌的發生發展是一個多因素和多基因變異的累積過程，其中遺傳變異和表觀遺傳學紊亂所導致的癌基因的擴增或突變和腫瘤抑制基因的沉默與功能喪失，在胃癌發生和進展中起重要作用(Cancer Genome Atlas Research N:Comprehensie molecularcharacterization of gastric adenocarcinoma.Nature 513:202-209,2014.)。表觀遺傳通過DNA甲基化及組蛋白等的修飾改變調控細胞組織特異性基因表達，參與機體的發育分化、功能代謝諸多生命活動。與基因突變不同，表觀遺傳學改變導致的漸進性表型變化(亞健康-疾病早期-疾病)在一定條件下可以逆轉，這一特性為一些疾病尤其是腫瘤的預防治療開辟了新的途徑，如抑癌基因啟動子區CpG島異常高甲基化及組蛋白修飾異常所致基因表達與功能的異常改變，不僅作為表觀遺傳標志物與靶點應用于腫瘤的分子診斷、治療及預后評估等，而且被認為是引發疾病以及化療耐藥形成的主要因素之一(Oh JH,Jung SH,Hong SJ,and Rhyu MG:DNA Methylation as Surrogate Marker For Gastric Cancer.JCancer Prev 20:172-178,2015.)。

近年來，大量文獻提及鋅指蛋白家族成員-髓樣鋅指蛋白1(myeloid zinc finger1，MZF1)在眾多惡性腫瘤的發生、發展及遠處轉移等方面發揮作用。金屬硫蛋白2A(MT2A)和NF-κB參與胃癌的致癌作用和化學敏感性。然而，MT2A在腫瘤發生和化學抗性中的NF-κB活化機制因腫瘤細胞類型的不同而不同，并且在胃癌中仍然不清楚其機制。我們最近發現人胃癌中MT2A和 NFκB抑制劑α(NFKBIA，也稱為IκB-α)的表達降低與患者預后不良有關。我們還通過二烯丙基三硫化物(DATS)提供了胃癌中MT2A表觀遺傳上調的第一個證據，DATS是一種大蒜衍生化合物能夠抑制胃癌進展的。研究表明，DATS能通過“MT2A-NF-κB”途徑增加胃癌細胞對化療藥物多西紫杉醇 (DOC)的敏感能力，其中DATS誘導的MT2A可能通過直接抑制NF-κB活化，在胃癌中增強NFKBIA(IκB-α)轉錄。然而，MT2A是一種低分子量的重金屬結合蛋白，不太可能通過直接結合其啟動子來調節NFKBIA活性作為轉錄因子。因此，MT2A和NF-κB之間的精確聯系仍有待闡明。