[發明專利]一種五唇蘭與火焰蘭屬間雜交培育蘭花新品種的方法

在審

• 申請號: 201811220523.1
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109122301A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 鄭楓;吳坤林;曾宋君;房林;李琳
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.一種五唇蘭與火焰蘭屬間雜交快速高效培育蘭花新品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)花粉收集及保存：在父本火焰蘭單花花瓣剛展開時，應用滅菌的挑取工具挑掉蘭花的藥帽，再用滅菌的挑取工具將蘭花花粉塊挑至潔凈無菌的容器中密封好，置于4～6℃避光保存；

(2)人工授粉及雜交果實培育：當母本五唇蘭開花時，將步驟(1)保存的花粉塊在室溫條件下解凍20～30min，然后再加入無菌水進行回濕處理20～30min，得到具有活力的花粉；將具有活力的花粉授粉于母本五唇蘭的花朵柱頭上，進行雜交蒴果的培育；

(3)雜種胚培養發育為原球莖：當雜交蒴果發育至100～120天，采摘雜交果實，經消毒后切開雜交果實，將粉末狀雜種胚接種至胚拯救培養基中進行無菌培養，得到原球莖，所述的胚拯救培養基每升含花寶1號1～2g、花寶2號1～2g、硫酸亞鐵25～30mg、乙二胺四乙酸二鈉20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子水50～80mL、香蕉泥50～100g、蘋果泥10～20g、活性碳500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、鹽酸硫胺素0.05～0.2mg、鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg、煙酸0.4～0.8mg、6-芐基嘌呤0.05～0.1mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g、瓊脂6～7g，余量為水，pH 5.4～5.6；

(4)原球莖增殖：將步驟(3)得到的單個原球莖轉移至類原球莖增殖培養基中進行克隆增殖培養，得到類原球莖群體，所述的類原球莖增殖培養基每升含花寶1號1～2g、花寶2號1～2g、硫酸亞鐵20～40mg、乙二胺四乙酸二鈉20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、鹽酸硫胺素0.05～0.2mg、鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg、煙酸0.4～0.8mg、6-芐基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g、瓊脂6～7g，余量為水，pH 5.4～5.6；

(5)原球莖分化培養：將步驟(4)得到的類原球莖群體轉移至分化培養基中進行分化培養，直至類原球莖群體分化形成不定芽，所述的分化培養基每升含花寶1號1～2g、花寶2號1～2g、硫酸亞鐵20～40mg、乙二胺四乙酸二鈉20～40mg、蛋白胨0.5～2g、香蕉泥50～80g、活性碳50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、鹽酸硫胺素0.05～0.2mg、鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg、煙酸0.4～0.8mg、6-芐基嘌呤3.0～5.0mg、萘乙酸0.4～0.5mg、蔗糖20～30g、瓊脂6～7g，余量為水，pH 5.4～5.6；

(6)不定芽生根成苗培養：將步驟(5)得到的3～5厘米不定芽轉移至生根壯苗培養基中進行成苗培養，所述的生根壯苗培養基每升含花寶1號1～2g、花寶2號1～2g、硫酸亞鐵20～40mg、乙二胺四乙酸二鈉20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥50～60g、活性碳500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、鹽酸硫胺素5～10mg、鹽酸吡哆醇0.5～1.0mg、煙酸5～10mg、萘乙酸0.5～1.0mg、蔗糖15～30g、瓊脂6～7g，余量為水，pH 5.4～5.6；

(7)成苗移栽及栽培：待不定芽長至高5～8cm的成苗時，轉移到自然光下煉苗10～20天，然后移入到基質中培育，得到五唇蘭與火焰蘭屬間雜交品種。

2.根據權利要求1所述的五唇蘭與火焰蘭屬間雜交快速高效培育蘭花新品種的方法，其特征在于，所述步驟(3)的在胚拯救培養基中進行無菌培養，其培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12h/d，所述的基質是蘭石：木屑：樹皮按體積比為1:1:1的混合基質。

3.根據權利要求1所述的五唇蘭與火焰蘭屬間雜交快速高效培育蘭花新品種的方法，其特征在于，所述步驟(4)的在類原球莖增殖培養基中進行增殖培養，其培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12h/d。

4.根據權利要求1所述的五唇蘭與火焰蘭屬間雜交快速高效培育蘭花新品種的方法，其特征在于，所述步驟(5)的在分化培養基中進行分化培養，其培養條件為：培養溫度為25～29℃，光照度2000～3000lx，光照12h/d。