[發(fā)明專利]具有高凝膠強度、高粘度、高酰基的結(jié)冷膠的制備方法

有效

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• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109251950B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張禹;張國沛;張少華;劉學(xué)珍
• 申請（專利權(quán)）人: 河北鑫合生物化工有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京前審知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11760
• 代理人: 張靜;張波濤

1.具有高凝膠強度、高粘度、高酰基的結(jié)冷膠的制備方法，其特征在于，所述包括如下工藝步驟：

A、將鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas sp.)CGMCC No.14238按照10％-20％的接種量將其接種到滅菌后且含有碳源、氮源及必要營養(yǎng)物質(zhì)的高碳氮比發(fā)酵培養(yǎng)基中；

B、調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的pH＝7.0-7.5，在溫度為35℃-37℃，通風(fēng)量為0.3vvm-0.8vvm的條件下進行通氣發(fā)酵；

C、發(fā)酵20-30小時補入無菌水及攜氧劑；其中補入無菌水及攜氧劑的工藝條件為：發(fā)酵20-30小時補入占發(fā)酵液體積3％-5％的無菌水以及占發(fā)酵液體積0.3％-0.6％的攜氧劑，所述的攜氧劑選自雙氧水、吐溫20中的一種或其結(jié)合；

D、當(dāng)培養(yǎng)液粘度不再增長或發(fā)酵周期≤50小時發(fā)酵結(jié)束；

E、發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液經(jīng)后提取制備成具有高凝膠強度、高粘度、高酰基的結(jié)冷膠；

所述的步驟A、B中發(fā)酵培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分含量的原料組成：

葡萄糖或麥芽糖3％-4％；

大豆分離蛋白0.1％-0.3％；

硝酸鈉0.1％-0.2％；

碳酸鈣0.1％-0.15％；

磷酸二氫鉀0.1％-0.25％；

有機硅消泡劑0.05％-0.15％；

余量為無菌水；

所述的步驟E的工藝條件如下：

將步驟D中發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液用質(zhì)量百分比為10％-20％的酸溶液調(diào)pH＝5.0-6.0，將調(diào)整pH＝5.0-6.0的發(fā)酵液加熱至70-80℃，當(dāng)發(fā)酵液冷卻至60℃以下時，先加入發(fā)酵液體積1/2、質(zhì)量百分比濃度為85％-95％的醇溶液攪拌均勻，再加入發(fā)酵液體積1.5倍、質(zhì)量百分比濃度為85％-95％的醇溶液，使結(jié)冷膠脫水析出，經(jīng)離心、干燥、粉碎后制成具有高凝膠強度、高粘度、高酰基的結(jié)冷膠；醇溶液選用乙醇溶液或異丙醇溶液；

其中，

采用高碳氮比培養(yǎng)基，在高溫條件下對鞘氨醇單胞菌(Sphingomonassp.)CGMCCNo.14238進行培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中補入無菌水及攜氧劑，微生物生長代謝速度快，縮短發(fā)酵周期在50h以內(nèi)，產(chǎn)物純度及收率高，能得到高品質(zhì)結(jié)冷膠，高溫培養(yǎng)同時減少了降溫水的利用；

發(fā)酵過程中連續(xù)補入無菌水和攜氧劑，在菌種對數(shù)生長期增加溶氧，有利于種子的生長和結(jié)冷膠的合成；

提取過程中醇加量階梯控制：萃取時醇的加入分兩次加入，第一次加入少量的醇，使結(jié)冷膠與醇充分接合，有利于結(jié)冷膠纖維的析出，減少包漿的形成，提高了結(jié)冷膠的溶解速度，第二次加醇同時降低了發(fā)酵液溫度，減少了醇的揮發(fā)；

采用弱酸條件下預(yù)處理及提取，有利于防止結(jié)冷膠酰基的脫落；

最終得到的結(jié)冷膠測定如下：

結(jié)冷膠酰基含量大于9％；

0.5％水溶液最終粘度達8000cp以上；

凝膠強度達800g/m²以上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有高凝膠強度、高粘度、高酰基的結(jié)冷膠的制備方法，其特征在于，步驟E中的酸溶液選用鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸溶液中的一種或其結(jié)合。