[發(fā)明專利]與努比亞山羊產羔性狀相關的分子標記及其組合應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811216879.8
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109337987A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設計）人: 蔣欽楊;鄒輝;韋英明
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 李秋琦

1.一種與努比亞山羊產羔性狀相關的分子標記，其特征在于：所述與努比亞山羊產羔性狀相關的分子標記為一組分子標記，分別為：

(1)BMPR1B基因序列第1內含子第1664位點，該位點具有A/G堿基的變異；

(2)BMP15基因序列第2外顯子第480位點，該位點具有C/G堿基的變異；

(3)GDF9基因序列第2外顯子第421位點，該位點具有C/T堿基的變異；

(4)FSHR基因序列第1外顯子第6位點、第5內含子第42位點、第5內含子第266位點，均具有C/T堿基的變異；

(5)FSHR基因序列的3’UTR第12位點，該位點具有C/A堿基的變異。

2.用于獲得權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于，包括：

(1)擴增BMPR1B基因序列第1內含子第1664位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:8所示，反向引物如SEQ ID NO:9所示；

(2)擴增BMP15基因序列第2外顯子第480位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:10所示，反向引物如SEQ ID NO:11所示；

(3)擴增GDF9基因序列第2外顯子第421位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:12所示，反向引物如SEQ ID NO:13所示；

(4)擴增FSHR基因序列第1外顯子第6位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:14所示，反向引物如SEQ ID NO:15所示；

擴增FSHR基因序列第5內含子第42位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:16所示，反向引物如SEQ ID NO:17所示；

擴增FSHR基因序列第5內含子第266位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:18所示，反向引物如SEQ ID NO:19所示；

(5)擴增FSHR基因序列的3’UTR第12位點的引物對：

正向引物如SEQ ID NO:20所示，反向引物如SEQ ID NO:21所示。

3.一種鑒定或輔助鑒定努比亞山羊產羔性狀的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待測努比亞山羊的基因組DNA，并混合成DNA池；

(2)以待測努比亞山羊的基因組DNA池為模板，利用權利要求2所述引物對分別進行PCR擴增，得到帶有權利要求1所述分子標記的DNA片段；

(3)對PCR擴增產物進行直接測序，通過觀察測序峰圖，如果擴增序列的峰圖上存在疊峰，且重疊部分大于90％，則認為該位點存在多態(tài)性，否則不能認為存在多態(tài)性；

(4)進一步使用時間飛行質譜進行基因分型檢測，判讀分子標記處的基因多態(tài)性。

4.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，從羊血中提取的基因組DNA的濃度為50ng/μL，取1.5μL DNA溶液，用分光光度計檢測OD260/OD280值，選取OD260/OD280值為1.6-1.9的純品DNA，從20個基因組DNA樣品各取0.5μL混在一個離心管里，使其混合均勻，成為一個混合池。

5.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述PCR擴增反應使用的擴增體系為：15μL 2×Taq Master Mix(Dye Plus)，上游引物(10μM)1μL，下游引物(10μM)1μL，DNA模板2μL，滅菌ddH2O加至總體系為30μL；所述的PCR擴增反應的條件為：預變性：94℃5min，變性：94℃30s，退火：55℃30s，延伸：72℃50s，終延伸：72℃5min；其中，變性、退火和延伸三個步驟循環(huán)34次，其余各步驟都是一次。