[發明專利]一種泰山天花提取物及其在制備抗咽炎藥物中的應用

有效

• 申請號: 201811216296.5
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN108938680B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 朱孟娟;劉姍姍;孟麗;王麗;李壯;王威;徐圣東;周金洋
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C07K14/375
• 分類號: C07K14/375;A61K36/07;A61P11/04;A61P31/04;A61K131/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

本發明屬于抗咽炎藥物領域，具體涉及一種泰山天花提取物及其在制備抗咽炎藥物中的應用。現有技術中針對泰山天花治療咽炎的機制及具體成分并不明確，目前認為泰山天花中的多糖及多酚成分具有抗金黃色葡萄球菌的效果，本發明通過低溫抽提獲得了具有活性的蛋白質部分，通過組織病理學實驗及血清生化指標檢測確定了本發明中的泰山天花提取物對金黃色葡萄球菌引起的咽炎具有治療作用，有望開發成為一種抗咽炎的藥物，具有重要意義。

技術領域

本發明涉及抗咽炎藥物領域，具體涉及一種泰山天花中的提取物及該提取物在制備抗咽炎藥物中的應用。

背景技術

咽炎(pharyngitis)為咽部的非特異性炎癥，是各種微生物感染咽部而產生炎癥的統稱，可單獨存在，也可與鼻炎、扁桃體炎和喉炎并存，或為某些疾病的前驅癥狀。可分為急性咽炎和慢性咽炎。急性咽炎為咽部黏膜及黏膜下組織的急性炎癥，咽淋巴組織常被累及，炎癥早期可局限，隨病情進展常可涉及整個咽腔，以秋冬及冬春之交較常見。主要表現為咽部干燥，灼熱，疼痛，吞咽疼痛明顯，咽部充血腫脹等。急性咽炎治療不徹底容易轉變為慢性咽炎，病癥頑固，易復發，難以治愈。其中金黃色葡萄球菌作為人類常見的病原菌，通常是導致咽炎的罪魁禍首。

泰山天花(Grifola frondosa)是在泰山特殊地理環境和氣候條件下形成的一種珍稀食藥用真菌，即泰山灰樹花，在泰山民間具有治療咽炎的歷史。民國泰安名醫高宗岳的《泰山藥物志》中記載：“天花，夏月連陰始生。陡出一本，形如牡丹得名。本品生山中松蔭之下，色白氣芳，生栗樹下者，性脆而芬。芬芳之天花，性清涼，療喉炎，常見之物也。”泰山民間自古采食，多用于治療咽炎、扁桃體炎等疾病。但泰山天花鮮品易腐爛，保存期短；干品容易遭受蟲蛀，不易保存，而且通過高溫烘干的樣品，喪失了治療咽炎的效果。泰山天花中真正用于治療咽炎的成分尚不明確，從泰山天花中分離得到抑制金黃色葡萄球菌、治療咽炎的物質，有利于抗咽炎藥物的進一步開發。

陳向東等人在“灰樹花多酚的提取和活性研究”中采用弱極性的大孔吸附樹脂從灰樹花菌絲體粗提物中提取了多酚類物質，通過平板稀釋法測定體外抗菌活性，實驗結果表明灰樹花多酚對于金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用。

柴瑞娟等人在“灰樹水提物的提取及其抑菌功能”中通過正交試驗確定了一種灰樹花多糖的最佳水提取方法，并證明了該條件下提取得到的灰樹花水提取物對于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及枯草芽孢桿菌具有抑制作用。

發明內容

本發明制備得到一種區別于現有技術的泰山天花提取物，經組織病理學實驗及生化實驗測試結果表明本發明方法制備的泰山天花提取物能夠有效緩解大鼠咽炎組織炎性細胞浸潤、充血，粘液腺上皮細胞壞死等癥狀，降低模型大鼠血清中的炎癥因子指標，為治療咽炎藥物的開發提供了新的研究方法。

本發明第一方面，提供一種泰山天花提取物的制備方法，步驟如下：

(1)取泰山天花子實體粉碎后加入去離子水低溫抽提一段時間后，離心取上清液。

(2)向上清液中加入硫酸銨溶液沉淀，沉淀一段時間后離心，棄去上清，留沉淀。

(3)向沉淀中加入去離子水溶解，然后用低分子量的透析膜透析一段時間，透析期間換水。

(4)向透析袋內的抽提液中加入一定pH的緩沖溶液進行等電點蛋白沉淀，沉淀后離心，保留沉淀部分并透析。

(5)透析完成后的溶液依次進行Q-Sepharose陰離子交換梯度層析、

DEAE-cellulose陰離子交換梯度層析、Q-Sepharose陰離子交換線性層析，收集有抗金黃色葡萄球菌的組分并透析。

(6)將透析完成后的溶液通過大分子量的超濾膜進行超濾，完成后濃縮，保留濾膜上層溶液。

優選的，步驟(1)中泰山天花子實體在0～8℃條件下抽提10～14h，6000～1000rpm轉速離心15～25min后取上清。