[發(fā)明專利]一種牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811209344.8
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109724965A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁望旺;吳勝昔;曾政;李俊萱;李令臣;魯友銘;侯力嘉;藺露;陳忠瓊;徐緣;李紅
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市動物疫病預(yù)防控制中心;重慶理工大學(xué)
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N21/64;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

1.一種牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括牛支原體P30蛋白單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG偶聯(lián)的受體微珠、帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原和鎳螯合的供體磁珠；所述受體微珠具有發(fā)光功能，所述供體磁珠具有感光功能；所述牛支原體P30蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述編碼所述牛支原體P30蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種應(yīng)用權(quán)利要求1～2任一項所述牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1)將山羊抗小鼠IgG偶聯(lián)的受體微珠和鎳螯合的供體磁珠分別用1×AlphaLISA稀釋劑將其濃度稀釋至100μg/ml；

2)在反應(yīng)板上分別設(shè)置陰性對照組和待檢測樣品組，向所述待檢測樣品組中每個孔加入5μL帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原、5μL牛支原體P30蛋白單克隆抗體和5μL待測樣品；向所述陰性對照組中每個孔加入5μL帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原、5μL牛支原體P30蛋白單克隆抗體和5μL去離子水；然后將所述反應(yīng)板置于微量震蕩器上震蕩30～60s，混勻后置于23℃培養(yǎng)箱，孵育1h；

3)向步驟2)反應(yīng)板中陰性對照組和待檢測樣品組的每個孔中分別加入5μL步驟1)制備的山羊抗小鼠IgG偶聯(lián)的受體微珠和鎳螯合的供體磁珠，然后將所述反應(yīng)板置于微量震蕩器上震蕩30～60s，混勻后置于23℃培養(yǎng)箱，避光孵育1h；

4)將步驟3)反應(yīng)后的反應(yīng)板置于AlphaScreen/Lisa檢測儀上檢測信號值；當(dāng)陰性對照組的檢測值大于待檢測樣品組檢測值的2倍時，即待檢測樣品中含有牛支原體抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原的工作濃度為0.5～20μg/ml；所述牛支原體P30蛋白單克隆抗體的工作濃度為0.5～25μg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原工作濃度為2.5μg/ml；所述牛支原體P30蛋白單克隆抗體的工作濃度為5μg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述AlphaScreen/Lisa檢測儀檢測時激發(fā)光波長為680nm，發(fā)射光檢測波長為615nm。