[發明專利]一種以磁性Fe3

有效

• 申請號: 201811202187.8
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN109321559B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 江波;曹永興;金輝;李寧;潘永勝;張濤;周煥霞
• 申請（專利權）人: 山東星光首創生物科技有限公司;江南大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種以磁性Fe₃O₄-多糖微球為載體固定化果糖基轉移酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）果糖基轉移酶制備：將黑曲霉發酵20-48 h，抽濾收集濕菌體；用0.1-0.5 mol/L、pH5.0-7.0的檸檬酸-磷酸緩沖液清洗，所得菌體用上述緩沖液制成菌體懸浮液；破碎菌體，冷凍離心后取上清液；上清液濃縮后制得粗酶液；

（2）磁性Fe₃O₄-多糖微球的制備：配制1-50 mg/mL的多糖溶液90-100 mL，加入摩爾比為1:2的FeCl₂和FeCl₃，在室溫下劇烈攪拌，調節pH至9-11，反應0.5-2 h后，溶液在40-80℃加熱20-40 min，過濾，洗滌，冷凍真空干燥，得到磁性Fe₃O₄-多糖微球；所述多糖為菊粉或果聚糖；

（3）磁性Fe₃O₄-多糖微球固定化果糖基轉移酶：取磁性Fe₃O₄-多糖微球加入pH 5.0-7.0的檸檬酸-磷酸緩沖液中充分浸泡溶脹，4-5 h后進行磁分離；加入果糖基轉移酶酶液固定；0-5℃靜置10-14h；通過磁場進行分離，用緩沖液反復洗滌沉淀，直至洗滌液中檢測不到酶活力，即得到固定化酶。

2.根據權利要求1所述的方法，所述磁性Fe₃O₄-多糖微球中多糖與鐵離子的質量比為1:5-1:10。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，磁性Fe₃O₄-多糖微球添加量為0.5 g；果糖基轉移酶的添加量為100-400 U/g磁性Fe₃O₄-多糖微球。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，固定條件為：在pH 5.0-7.0、20-25 ℃的條件下，以100-200 rpm的轉速在恒溫搖床中振蕩。

5.一種磁性Fe₃O₄-多糖微球，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄-多糖微球按照如下方法制備：配制1-50 mg/mL的多糖溶液90-100 mL，所述多糖為菊粉或果聚糖；向多糖溶液中加入摩爾比為1:2的FeCl₂和FeCl₃，在室溫下劇烈攪拌，調節pH至9-11，反應0.5-2 h后，溶液在40-80℃加熱20-40 min，過濾，洗滌，冷凍真空干燥，得到磁性Fe₃O₄-多糖微球。

6.權利要求5所述的磁性Fe₃O₄-多糖微球在固定化果糖基轉移酶中的應用。