[發明專利]GnRH類似物－抗腫瘤藥物偶聯物、其制備方法及用途

有效

• 申請號: 201811201322.7
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN109248324B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 李松濤;趙紅玲;趙桂琴;毛曉霞;王建平;郝婷;鄧淑華
• 申請（專利權）人: 承德醫學院
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 黃綠雯

1.一種GnRH類似物－抗腫瘤藥物偶聯物，其特征在于所述偶聯物具有如下所示的結構:

GnRHa-Linker-Dox

其中，GnRHa為GnRH類似物，其肽序列為pGlu¹-His²-Trp³-Ser⁴-Tyr⁵-_D-Cys⁶-Leu⁷-Arg⁸-Pro⁹-NHEt；Linker為連接臂，用于將GnRHa與抗腫瘤藥物偶聯；Dox為抗腫瘤藥物阿霉素，所述連接臂具有下式所示的結構：

其中n = 0、1、2、3、4；

所述偶聯物具有下式所示的結構：

。

2.一種GnRH類似物－抗腫瘤藥物偶聯物的制備方法，所述方法包括以下步驟：

（1）制備[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH：

采用固相多肽合成法，在N,N'-二異丙基乙胺存在的條件下由9-芴甲氧羰基保護氨基的脯氨酸和取代度為1.3mmol/g 的2-CTC樹脂反應得到Fmoc-Pro-CTC樹脂，其中2-CTC樹脂與N,N'-二異丙基乙胺與9-芴甲氧羰基保護氨基的脯氨酸的摩爾比為1：3：3；所得Fmoc-Pro-CTC樹脂經過體積濃度為20%的哌啶/N, N'-二甲基甲酰胺溶液除去Fmoc保護基團后，以N, N'-二異丙基碳二亞胺/1-羥基苯并三唑為縮合試劑，按照肽序列從C端向N端逐步偶聯氨基酸得到全保護肽樹脂，其中Fmoc-Pro-CTC樹脂、N, N'-二異丙基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑和Fmoc-氨基酸的摩爾比為1:4.5:4.5:4.5，偶聯時間為2 h；按照質量體積比為1g:10mL的比例向所述全保護肽樹脂中添加體積濃度為2%三氟乙酸的二氯甲烷中溶液切肽；所得全保護肽用質量體積比為1g:5mL的二氯甲烷溶解，通過N,N'-二異丙基乙胺調節體系pH為9，加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺鹽酸鹽，其中全保護肽與六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺鹽酸鹽的摩爾比為1：1.5：1.5，HPLC監控反應進程，反應完畢后將體系減壓濃縮，按照質量體積比為1g:10mL的比例向所得產物中加入體積比為90/5/3/2的三氟乙酸/甲基苯基硫醚/1, 2-乙二硫醇/苯甲醚的裂解液脫除側鏈保護基團，室溫反應2 h后將體系減壓濃縮，然后用10倍于反應濃縮液體積的冰乙醚沉降、洗滌，所得固體用反相高效液相色譜純化、冷凍干燥后得到[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH純品；

（2）制備阿霉素衍生物

將阿霉素鹽酸鹽、異雙功能基團連接臂和三乙胺用無水N, N'-二甲基甲酰胺溶解，其中阿霉素鹽酸鹽、異雙功能基團連接臂和三乙胺的摩爾比為1：1.0 ~ 2.0：2.0 ~ 3.0，室溫攪拌反應1~3 h；反應完畢后用2 ~ 5倍于反應液體積的冰乙醚沉降，所得沉淀用冰乙醚洗滌，真空恒溫干燥得阿霉素衍生物；

所述的異雙功能基團連接臂為2-馬來酰亞胺基乙酸羥基琥珀酰亞胺酯、3-馬來酰亞胺基丙酸羥基琥珀酰亞胺酯、4-馬來酰亞胺基丁酸羥基琥珀酰亞胺酯、5-馬來酰亞胺基戊酸羥基琥珀酰亞胺酯或6-馬來酰亞胺基己酸羥基琥珀酰亞胺酯；

（3）[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH與阿霉素衍生物的偶聯

將步驟（1）得到的[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH與步驟（2）得到的阿霉素衍生物用N, N'-二甲基甲酰胺溶解，以三乙胺為催化劑，其中[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH、阿霉素衍生物和三乙胺的摩爾比為1：1.0 ~ 2.0：15.0 ~ 25.0；N₂保護下室溫攪拌反應1~3h，反應完畢后用8 ~ 10倍于反應液體積的冰乙醚沉降、洗滌，所得固體用反相高效液相色譜純化、冷凍干燥后得到所述GnRH類似物－抗腫瘤藥物偶聯物，所述偶聯物具有下式所示的結構：

其中n = 0、1、2、3、4。