[發明專利]分散固相萃取-液相色譜-質譜/質譜法同時測定蜂王漿中雙甲脒及代謝產物殘留量的方法

在審

• 申請號: 201811194818.6
• 申請日: 2018-10-15
• 公開（公告）號: CN109001362A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 侯建波;謝文;洪燈;張文華;錢艷;江鵬;盛濤;韓超
• 申請（專利權）人: 浙江省檢驗檢疫科學技術研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州恒翌專利代理事務所(特殊普通合伙) 33298
• 代理人: 王從友

本發明涉及蜂王漿中雙甲脒及其3種代謝產物殘留量測定的方法，尤其涉及分散固相萃取?液相色譜?質譜/質譜法同時測定蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的方法。該方法在試樣中加入pH=9的緩沖溶液稀釋后用乙腈、氯化鈉沉淀蛋白、提取、鹽析，通過含有N?丙基乙二胺（PSA）、無水硫酸鎂和C18粉末的吸附劑進行分散固相萃取對提取液進行凈化，采用液相色譜?質譜/質譜儀檢測，同位素內標稀釋內標法定量。該方法綠色友好、簡便快捷，消耗資源小，檢測成本低，方法靈敏度能滿足蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的檢測和確證要求。

技術領域

本發明涉及蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量測定的方法，尤其涉及一種分散固相萃取-液相色譜-質譜/質譜法同時測定蜂王漿中雙甲脒、單甲脒2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺殘留量的方法。

背景技術

蜂王漿(royal jelly)，是蜜蜂巢中培育幼蟲的青年工蜂咽頭腺的分泌物，也是供給將要變成蜂王的幼蟲的食物和蜂王終身的食物。研究發現，蜂王漿就像哺乳動物的乳汁極具營養價值和免疫功能而且含有極高的長壽因子。營養學家認為蜂王漿是一種可供人類直接服用的高活性成分的超級營養食品。近些年研究表明，蜂王漿具有輔助降低血糖，抗氧化，降低血脂，控制血管擴張，降低血壓，保護肝臟，抗菌消炎以及提高免疫力抗衰老等醫療和保健的功效，因此越來越受到人們的關注與歡迎。

中國是世界蜂王漿第一生產國，也是第一出口國，世界上90％以上的蜂王漿來自于中國，主要出口國家和地區有日本，歐盟和美國等發達國家和經濟體。蜂王漿也是除蜂蜜外最具市場競爭力和高附加值的蜂產品。伴隨著人民生活水平的提高，對蜂王漿質量要求也在不斷的提高。蜂王漿中藥物殘留情況一直是消費者除營養成分外的主要關注點，我國藥物和抗生素曾經的濫用情況較為突出，蜂蜜等蜂產品中氯霉素等的藥物檢出曾對其出口造成嚴重的不利影響。

雙甲脒(Amitraz)，又稱N,N-雙(2,4-二甲苯亞氨基甲基)甲胺，是一種有機氮殺蟲、殺螨劑，其具有觸殺和熏蒸作用，對葉螨科各發育階段的蟲態都有效。因此廣泛用于果樹、蔬菜、茶葉、棉花、大豆、甜菜等作物防治多種害螨，對同翅目害蟲也具有良好藥效，還可以用于防治蚜蟲、棉鈴蟲、紅鈴蟲等害蟲。對牛、羊、豬等家畜體外寄生螨也有效，可以防治體虱、壁虱、疥癬和恙蟲等，在蜂蜜養殖中對蜂螨有較好的防治效果，且對蜜蜂屬于低毒性，因此曾被廣泛用于蜂巢除螨。根據雙甲脒的化學性質，其可發生代謝或降解，先形成單甲脒(N-2,4-Dimethyl phenyl-N-methylformamidine，DMPF)、2,4-二甲基苯基甲酰胺(N-(2,4-DiMethylphenyl)formamide，DMF)，最終降解為2,4-二甲基苯胺(2,4-Dimethylaniline，DMA)。其中單甲脒既是雙甲脒的一個代謝產物，其自身也是殺螨劑，能防治抗三氯殺螨醇的螨，殺螨卵、若螨和成螨，對棉紅鈴蟲、水稻三化螟和二化螟也有一定活性。單甲脒在防治柑橘、蘋果、棉花等作物上的螨，對瓢蟲、草蛉、食蟲蝽象、食螨瓢蟲、棉田蜘蛛、蜜蜂、家蠶比較安全，其毒性較雙甲脒要低。2,4-二甲基苯胺在化工合成中通常作為單甲脒和雙甲脒的合成原料而被使用，但研究表明2,4-二甲基苯胺具有毒副作用和致突變性，對肝臟的損傷較大。

通過食物鏈傳播或直接在蜂巢中使用雙甲脒后，所產生的蜂王漿比較容易被雙甲脒及其代謝產物污染，進而影響消費者的身體健康，如表1所示，各國紛紛制定雙甲脒在蜂產品中(以蜂蜜居多)的最低限量，來保證其的質量安全。

表1主要國家和經濟體對蜂產品中雙甲脒的限量要求

韓國等國家雖然在蜂王漿中并未明確規定雙甲脒的限量要求，但在豬肉等其他動物源性產品以及果蔬產品中雙甲脒的最低限量都有明確規定，我國在出口蜂王漿的殘留監控中也明確要求雙甲脒不得檢出(同時檢測代謝產物)。

基于雙甲脒的穩定性以及代謝情況和檢測手段的限制，目前食品中雙甲脒殘留量的測定通常是將樣品進行通過酸、堿環境下高溫水解后對最終代謝產物2,4-二甲基苯胺進行測定，再數學轉化成雙甲脒的含量。其中以氣相色譜法或者氣相色譜-質譜法為主。