[發明專利]一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法

在審

• 申請號: 201811194764.3
• 申請日: 2018-10-02
• 公開（公告）號: CN109437988A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 敖日格樂;斯木吉德;王純潔
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C05F11/08
• 分類號: C05F11/08;C12N1/20;C12N1/02;C12R1/05;C12R1/07
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1.一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、篩選低溫纖維素降解菌；

步驟二、將篩選得到的低溫纖維素降解菌與堆肥用纖維素降解菌混合制備成混合菌液；

步驟三、在堆肥槽內加入牛糞便、鋸末以及步驟二中制得的混合菌液，并調整含水量。

2.根據權利要求1所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低溫纖維素降解菌的篩選方法按照下列步驟進行：一、纖維素降解菌的分離與純化，二、低溫纖維素降解菌的初篩與復篩，三、低溫纖維素降解菌酶活力測定。

3.根據權利要求2所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：所述纖維素降解菌的分離與純化的過程如下，稱取10g牛糞便樣品放入裝有玻璃珠的250mL錐形瓶中，加入100mL滅菌蒸餾水，在搖床中振蕩30min；取10mL懸液加入到滅菌后的富集培養基中，20℃恒溫振蕩培養3～4d，至培養基變渾濁。將渾濁的培養基進行10倍梯度稀釋，取合適倍數的稀釋液于羧甲基纖維素平板上均勻涂布，20℃培養3～4d，至形成單個菌落；將單個菌落反復劃線培養，以此得到純菌株。

4.根據權利要求2所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低溫纖維素降解菌的初篩與復篩的過程如下，將純纖維素降解菌株用接種環劃線接種子羧甲基纖維素培養基上，20℃培養至形成單個菌落；用0.2％剛果紅染色15min，用蒸餾水洗去染液后，再以1mol/L NaCl浸洗15min，根據產生水解圈與否判斷是否為纖維素降解菌，其次據水解圈直徑的大小，篩選出水解圈與菌落直徑比值較大的菌株；得到的菌種分別在0℃、4℃、10℃、15℃下培養3～4d。

5.根據權利要求2所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低溫纖維素降解菌酶活力測定的過程如下，取0.05moL/L含有2％CMC-Na的檸檬酸緩沖液1.5mL于離心管中，加入0.5mL制備好的粗酶液，50℃放置30min，后加入試劑DNS，100℃水浴5min，立即冰浴，加8mL水稀釋，并于540nm處測溶液的光密度值。

6.根據權利要求2所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低溫纖維素降解菌酶活力測定的過程如下：取4個離心管都加入0.05moL/L的檸檬酸緩沖液1.5mL，再加入0.5mL制備好的粗酶液，其中一管作為對照管并加入1.5mL試劑DNS將酶活性失活；四個離心管50℃水浴預熱5min，各加入0.05g定量濾紙條，50℃放置反應30min；反應后向另外3個離心管中各加入1.5mLDNS試劑以終止酶反應；將四支離心管充分混勻后100℃水浴加熱5min，取出冰浴冷卻后用蒸餾水定容至10mL，以對照管為空白對照，測定540nm處測溶液的光密度值。

7.根據權利要求1所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：在步驟二中，所述低溫纖維素降解菌為產堿桿菌屬的糞產堿桿菌以及芽孢桿菌屬的龍舌蘭芽孢桿菌。

8.根據權利要求1所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：在步驟三中，所述牛糞便與鋸末的重量比3∶1。

9.根據權利要求1所述的一種利用低溫纖維素降解菌群提高低溫下堆肥效率的方法，其特征在于：在步驟三中，所述堆肥反應物中含水量為55-60％。