[發明專利]一種利用扦插繁殖鑒定藜麥霜霉病抗病性的方法

有效

• 申請號: 201811162355.5
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109328683B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 殷輝;趙曉軍;周建波;呂紅;秦楠;常芳娟;翟世玉
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: A01G2/10
• 分類號: A01G2/10;A01G22/20;A01G13/00;A01N65/08;A01N63/22;A01N43/78;A01N37/40;A01N59/26;A01N59/06;A01N59/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

1.一種利用扦插繁殖鑒定藜麥霜霉病抗病性的方法，包括如下步驟：

（1）制備扦插生根液 扦插生根液由扦插生根液A和扦插生根液B配置而成：扦插生根液A：稱量1公斤藜麥秸稈加1L水，高壓滅菌后，在無菌環境下加1ml濃度為3.5 ×109 cfu/mL枯草芽孢桿菌菌液，置于24～26℃發酵30 d，濾出發酵浸提液，備用；扦插生根液B：量取1L無菌水，溶入2.5mg維生素B1、6.5mg磷酸二氫鉀、3.5mg硫酸鎂、5.5mg硝酸銨、0.5 mg阿司匹林，配制成培養液，調節培養液的pH值為6.8～7.0，備用； 將扦插生根液A與扦插生根液B按體積比10：1配制成扦插生根液，然后分裝于50～100ml的容器中，液面高度3.5～4.0cm，備用；

（2）制備扦插穗 在藜麥母株上截取長勢好、無病蟲害、直徑為0.8～1.2 cm、長30cm的分枝，剪去分枝15cm以下的葉片，切口位于分枝葉柄疤痕下0.5～1.0 cm處；切口修剪為與分枝軸線呈約50-60度角的斜面，切面平滑、韌皮部不留毛茬且無損傷，制成扦插穗；

（3）扦插與培養 把（2）制備好的扦插穗的切口浸泡于35%的啤酒水溶液中消毒5～8min，然后插在（1）制備的扦插生根液中，置于人工氣候箱，在18～20℃、光照強度3500lx，光照時間6h、黑暗18h的條件下培養，扦插液蒸發后及時補存至3.5～4.0cm高度，當扦插穗切口處明顯看到白色細根時，調節氣候箱的培養條件為：20～22℃、光照 6500 lx，光照時間10h、黑暗14h培養，培養10～15d，根系長4.5～5.5cm時備接種霜霉菌使用；

（4）病原物收集 田間采集具有藜麥霜霉病癥狀的病葉置于10℃條件下保藏20～24h，用毛刷將新鮮病葉的霜霉菌霉層刷除，無菌水沖洗3次，然后將葉片用濕潤的脫脂棉花包裹，置于人工氣候箱，培養條件是：18℃、1200lx、光照時間6h、黑暗18h，脫脂棉花處保濕狀態，培養36 h后掃刷病葉長出的新鮮霉層，新鮮霉層即為霜霉病菌孢子囊，收集到1.5mL離心管中，置于10℃保藏，備用；

（5）制備吐溫80溶液 用無菌水配制含1.5%吐溫80的溶液；

（6）抗病性鑒定 取（4）收集好的藜麥霜霉病菌孢子囊置于（5）制備的吐溫溶液中，調節孢子囊懸浮液濃度為1×108個孢子囊/毫升；用培養（3）的扦插穗進行接種，即用移液器吸取30微升的孢子囊懸浮液涂抹于藜麥的葉片正面，接種后置于人工氣候箱，培養條件是：20℃、黑暗培養15h，然后將氣候箱培養條件調為：20～22℃、6500 lx、光暗交替，光照時間10h、黑暗14 h培養，每插穗接種15片葉子、重復3次，5d后調查結果；

（7）鑒定結果計算方法 按葉片的感病面積分級記載，計算病情指數進而評價藜麥的抗病性。

2.根據權利要求1所述的一種利用扦插繁殖鑒定藜麥霜霉病抗病性的方法，其特征在于，所述的啤酒為酒精度為3%～4% vol、麥汁度10 °P～12 °P的市售啤酒。

3.根據權利要求1所述的一種利用扦插繁殖鑒定藜麥霜霉病抗病性的方法，其特征在于，所述的病情指數的計算公式為：

。