[發明專利]溫敏細胞培養表面及其制備方法

在審

• 申請號: 201811116498.2
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN110938323A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 李慧倫;顧穎詩;袁曄;袁建華
• 申請（專利權）人: 廣州潔特生物過濾股份有限公司
• 主分類號: C09D4/02
• 分類號: C09D4/02;C09D7/63;C12N5/00;B05D7/24;B05D3/06;B05D3/14
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 李悅

本發明涉及一種溫敏細胞培養表面及其制備方法。該溫敏細胞培養表面的制備方法包括以下步驟：1)將溫敏單體、交聯劑加入溶劑中，混合均勻即得所述溫敏液；2)將細胞培養裝置放入等離子發生器內進行等離子處理，處理時間為15s～30s；3)將所述溫敏液均勻的涂布在表面預處理后的所述細胞培養裝置的培養面上；4)將涂布處理后的所述細胞培養裝置置于高能電子發射器中進行高能電子束輻射接枝處理；5)對輻照處理后的所述細胞培養裝置進行清洗。本發明的溫敏細胞培養表面的制備方法能夠讓溫敏液均勻涂布在細胞培養表面，確保溫敏細胞培養表面各處的溫敏功能平衡。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別是涉及一種溫敏細胞培養表面及其制備方法。

背景技術

體外動物細胞培養是生物醫藥產業及其相關研究領域的一種常用技術。隨著人們對生物制藥產業和相關研究領域需求的日益增加，細胞培養相關領域的發展也日漸繁榮。細胞培養相關的耗材、裝置和設備是細胞培養過程中必需的物品，目前用于細胞培養的產品主要包括小規模的細胞培養裝置，例如細胞培養皿、細胞培養瓶、細胞培養板；以及大規模的細胞培養類產品主要包括細胞工廠(例如Thermofisher和Corning公司的細胞工廠高達40層的細胞培養表面)、粉末微載體顆粒(例如GE生命科學的Cytopore、Cytoline、Cytodex類產品的細胞培養面積可達2000cm²/g)等。

傳統的細胞培養裝置在細胞培養完成后，大多采用以下兩種方式收獲細胞：一是機械方式，例如直接采用細胞刮刀刮下細胞培養表面的細胞；二是生物方式，采用添加蛋白酶類消化液(例如胰蛋白酶)對細胞的貼壁層蛋白進行消化以使細胞貼壁層膜蛋白遭到破壞，從而使細胞從細胞培養表面上脫落下來，最后添加一定量的血清終止多余的蛋白酶的消化作用。但上述細胞收獲方式中，機械方式在收獲時容易刮傷細胞，造成細胞形態及活性的破壞；而生物方式在收獲時，蛋白酶的消化一方面會破壞細胞外基質使細胞的結構和功能遭受一定程度的破壞，另一方面蛋白酶消化后會殘留一些消化生成的化學物質而降低了細胞培養類產品的純度，且成本較高。

為了克服傳統細胞培養表面在收獲細胞時存在的缺陷，溫度響應性細胞培養表面的研究越來越受到人們的關注。溫度響應性細胞培養表面在完成細胞培養后，只需要將培養環境的溫度降低到最低臨界溫度以下即可實現細胞的收獲。溫度響應性細胞培養表面收獲細胞時既不會損害細胞外基質，也不會殘留胰酶消化時生成的化學物質。溫度響應性細胞培養表面在制備時，需要將溫敏液均勻地涂布到細胞培養表面上，但在實際操作中，溫敏液往往會發生回縮，聚集堆積在細胞培養表面，溫敏液聚集區域在溫度達到最低臨界溫度后，細胞仍不能脫落；而溫敏液稀疏區域在溫度還未達到最低臨界溫度前，就已經有細胞開始脫落，導致細胞培養表面各處溫敏功能的不平衡。

發明內容

基于此，有必要針對現有溫度響應性細胞培養表面存在的溫敏單體涂布不均勻的問題，提供一種溫敏單體涂布均勻的溫敏細胞培養表面及其制備方法。

具體的技術方案如下：

一種溫敏細胞培養表面的制備方法，包括以下步驟：

1)溫敏液的制備：將溫敏性單體、交聯劑加入極性溶劑中，混合均勻即得所述溫敏液；

2)表面預處理：將細胞培養裝置放入等離子發生器內進行等離子處理，處理時間為15s～30s；

3)涂布處理：將所述溫敏液均勻的涂布在表面預處理后的細胞培養裝置的培養面上；

4)輻照處理：將涂布處理后的細胞培養裝置置于高能電子發射器中進行高能電子束輻射接枝處理；

5)清洗處理：對輻照處理后的所述細胞培養裝置進行清洗。

在其中一個實施例中，所述表面預處理的處理時間為20s～30s。