[發(fā)明專利]抗Claudin18A2嵌合抗原受體、其修飾的T細胞及T細胞制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811112136.6
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN109206524B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉明錄;王立新;韓慶梅;萬磊;盧永燦;張傳鵬;劉敏;馬洪華;金海鋒;馮建海
• 申請（專利權(quán)）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 山東華君知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37300
• 代理人: 張儉偉

本發(fā)明公開了抗Claudin18A2嵌合抗原受體、其修飾的T細胞及T細胞制備方法和用途，其中抗Claudin18A2嵌合抗原受體，包括依序連接的CD8αLeader、Claudin18A2抗原結(jié)合區(qū)、CD8的Hinge區(qū)和跨膜區(qū)、4?1BB和CD28的共刺激區(qū)、CD3ζ的信號傳導(dǎo)區(qū)。本發(fā)明創(chuàng)造性的選擇Claudin18A2靶點，同時結(jié)合敲除T細胞中的PD?1蛋白，使得改造后的T細胞提高對消化系統(tǒng)腫瘤，尤其是對胃癌的治療效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗Claudin18A2嵌合抗原受體、其修飾的T細胞及T細胞制備方法和用途。

背景技術(shù)

PD-1(程序性死亡受體1，programmed death 1)是55KD的跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。其胞外區(qū)只有1個IgV樣區(qū)，胞漿區(qū)有2個酪氨酸殘基，尾部有1個ITIM(immunoreceptor tryosine-based inhibitory motif)。PD-1可表達于活化的T細胞、B細胞和骨髓細胞，以及CD4-CD8-胸腺細胞。PD-1有兩個配體，PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，均為B7家族中的新成員。PD-1是免疫抑制性受體，與其配體PD-L1、PD-L2相互作用傳遞抑制性信號，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮負向調(diào)控作用。T細胞上的PD-1與腫瘤細胞中的PD-L1/PD-L2的結(jié)合，可抑制活化的T細胞攻擊腫瘤細胞，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能發(fā)揮全部作用，使腫瘤細胞逃逸。

由于PD-1蛋白在免疫應(yīng)答中發(fā)揮負向調(diào)控作用，使得部分腫瘤細胞逃避T細胞的攻擊，造成腫瘤細胞的擴散。敲除T細胞中的PD-1蛋白，可擴大T細胞的攻擊范圍，增強T細胞的免疫能力。本研究中利用Crispr/Cas9系統(tǒng)，敲除T細胞中的PD-1基因，使其不表達PD-1蛋白，打開免疫系統(tǒng)的剎車閘，增強免疫系統(tǒng)的功能。

申請人進行了深入的研究，并于2017年5月9日提交了申請?zhí)枮?01710322510.4的中國發(fā)明專利，公開了一種敲除PD-1的T細胞制備方法，該技術(shù)是利用Crispr/Cas9系統(tǒng)來敲除PD-1基因。本發(fā)明還涉及Crispr/Cas9技術(shù)修飾的T細胞，所述T細胞表面含有PD-1蛋白，可與癌細胞表面的PD-L1蛋白結(jié)合，阻礙活化T細胞攻擊癌細胞。敲除T細胞中的PD-1基因，打開了免疫系統(tǒng)的剎車閘，增強免疫系統(tǒng)的功能。

目前，在全球范圍內(nèi)，胃癌占據(jù)腫瘤中的第五位，其致死率占據(jù)第三位。在東亞和東歐最常見，男性發(fā)病率約為女性的2倍。胃癌的發(fā)病原因有很多，最常見原因是幽門螺桿菌的感染，占病例總數(shù)的60％以上。吸煙、腌制蔬菜和肥胖等飲食因素也是引發(fā)胃癌的危險因素。大約10％的病例發(fā)生在家庭中，1％到3％的病例是由遺傳病引起的遺傳綜合癥，如遺傳性彌漫性胃癌。申請人在長期的研究中發(fā)現(xiàn)，單純敲除T細胞中的PD-1基因而制備得到的基因藥物，對消化系統(tǒng)腫瘤，尤其是胃癌效果有待于進一步的提升，但是，處于瓶頸階段的技術(shù)提升難度極大，也是本領(lǐng)域的技術(shù)難題。

因此，在以上技術(shù)的基礎(chǔ)上研究一種抗Claudin18A2嵌合抗原受體、其修飾的T細胞及T細胞制備方法和用途，不但具有迫切的研究價值，也具有良好的經(jīng)濟效益和工業(yè)應(yīng)用潛力，這正是本發(fā)明得以完成的動力所在和基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供抗Claudin18A2嵌合抗原受體、其修飾的T細胞及T細胞制備方法和用途，以提高對消化系統(tǒng)腫瘤，尤其是對胃癌的治療效果。

第一方面，本發(fā)明提供的抗Claudin18A2嵌合抗原受體，包括依序連接的CD8αLeader、Claudin18A2抗原結(jié)合區(qū)、CD8的Hinge區(qū)和跨膜區(qū)、4-1BB和CD28的共刺激區(qū)、CD3ζ的信號傳導(dǎo)區(qū)。