[發明專利]一種巴倫葛茲類芽孢桿菌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201811105536.4
• 申請日: 2018-09-21
• 公開（公告）號: CN109182303B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 江正強;劉翊昊;閆巧娟;馬帥;楊紹青
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N1/21;C12P19/26;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

1.氨基酸序列如序列表中序列1所示的蛋白質在水解幾丁二糖中的應用。

2.制備N-乙酰氨基葡萄糖的方法，為方法A或方法B或方法C；

所述方法A包括如下步驟：采用權利要求1中所述的蛋白質水解幾丁二糖，制備β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述水解的液體環境為pH 5.5、50 mM乙酸-乙酸鈉緩沖液；所述水解的溫度為60℃；所述的蛋白質在水解體系中的濃度為1 U/mL；

所述方法B包括如下步驟：采用權利要求1中所述的蛋白質水解幾丁寡糖，制備β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述幾丁寡糖的聚合度為3-5；所述水解的液體環境為pH 5.5、50 mM乙酸-乙酸鈉緩沖液；所述水解的溫度為60℃；所述的蛋白質在水解體系中的濃度為1 U/mL；

所述方法C包括如下步驟：采用權利要求1中所述的蛋白質和幾丁質酶協同水解幾丁質制備β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述的蛋白質在水解體系中的濃度為1 U/mL；所述幾丁質酶在水解體系中的濃度為5 U/mL；所述水解的液體環境為pH 5.5、20 mM的檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液；所述水解的溫度為55℃；

所述幾丁質需經過預處理，所述預處理方法為：（1）取幾丁質粉末，與球磨珠按照體積比2：1混合，球磨機轉速380 r/min，功率4 kW，球磨4 h后取出放置干燥箱中；（2）將步驟（1）得到的球磨幾丁質與天然低共熔溶劑混合，球磨幾丁質在溶液中的質量百分含量為3%，110℃反應40 min后取出，在冰上加入過量的蒸餾水，11510 g離心6 min，收集沉淀，加入過量的蒸餾水重懸，超聲5 min，以上步驟重復3次，最后將預處理過后的幾丁質粉末凍干備用；所述天然低共熔溶劑的制備方法為：分別以1:2的摩爾比例精確稱取一定量的氯化膽堿和乳酸，混合后80℃水浴 2 h直至獲得澄清透明液體，放置干燥箱中1-2周。

3.包括權利要求1中所述蛋白質和幾丁質酶的組合物在制備產品中的應用，所述產品的功能為催化幾丁質轉化為N-乙酰氨基葡萄糖。

4.包括權利要求1中所述蛋白質和幾丁質酶的組合物在制備N-乙酰氨基葡萄糖中的應用。