[發明專利]一種乳酸菌胞外多糖及免疫佐劑

有效

• 申請號: 201811092741.1
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109182186B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 王瀟;修磊;杜瑞平
• 申請（專利權）人: 內蒙古大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;A61K39/39;A61P37/04;C12R1/245
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

本發明公開了一種乳酸菌胞外多糖及免疫佐劑。本發明保護的干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030，其保藏編號為：CGMCC No.12415。其胞外多糖能顯著增強小鼠骨髓來源樹突狀細胞分泌細胞因子。將胞外多糖與OVA抗原免疫小鼠，可以顯著提高小鼠血清中OVA特異性IgG抗體以及IgG抗體亞類的滴度；胞外多糖還能顯著促進脾臟T淋巴細胞增殖以及INF?γ和IL?4的分泌；顯著提高脾臟IL?4⁺CD4⁺T細胞、IFN?γ⁺CD4⁺T細胞以及IFN?γ⁺CD8⁺T細胞的比例；此外，胞外多糖還可以顯著增強口蹄疫滅活疫苗在小鼠上誘發的特異性抗體滴度。

技術領域

本發明涉及一種乳酸菌胞外多糖及免疫佐劑。

背景技術

疫苗是防控傳染病的核心制品,在預防和控制動物傳染病,保障人類健康、畜牧業和農業的可持續發展中起著重要的作用。盡管在疫苗開發制備等方面做出了很多努力，但目前部分疫苗的免疫效果并不理想，要克服現有疫苗引起的免疫應答效應單一，免疫原性弱的缺點，需輔于更為有效的免疫佐劑來增強疫苗的免疫應答。佐劑應用于疫苗中，能夠提高抗原的免疫原性，增強疫苗的效果，降低抗原的使用量，使疫苗在價格上具有明顯優勢。因此，研發新型安全、有效的疫苗佐劑來激發機體產生高效的天然和獲得性免疫應答，提升體液和細胞免疫應答水平，豐富疫苗的免疫應答類型，充分發揮出疫苗的免疫保護作用，是未來新型免疫佐劑研發的重要發展方向。

鋁佐劑自1926年發現以來，至今已有80多年的歷史，是至今唯一通過FDA批準的能用于人的佐劑。但隨著疫苗研發品種的增加，發現其使用存在一定的局限性，且會存在一定的副作用，遠遠不能滿足新型疫苗佐劑的要求。理想的新型免疫佐劑應該是對動物機體的細胞或體液免疫均有有效的激發作用、作用持久穩定、免疫次數減少、副作用小,同時便于生產和易于注射。

多糖是細胞與細胞間相互作用中重要的信號分子，在激活和調節先天性和適應性免疫反應中起到重要的作用。越來越多的研究證明多糖是一種良好的免疫增強劑。。

乳酸菌胞外多糖(LAB EPS)是乳酸菌在其生長和代謝過程中所分泌到細胞外的一種多糖類化合物。乳酸菌通常被認為是食品安全級(GRAS)微生物，因此，它們所產的EPS同樣也被認為是安全無毒的，備受廣大研究者們的青睞。研究表明,乳酸菌胞外多糖對免疫系統發揮多方面的重要調節作用，而且安全無毒，成為安全高效新型疫苗佐劑的候選資源。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳酸菌胞外多糖及免疫佐劑。

本發明提供的干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030，已于2016年05月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC；地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所；郵編：100101)，保藏編號為CGMCCNo.12415。

本發明還保護干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030或其培養物在制備胞外多糖中的應用。

本發明還保護酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030的胞外多糖的制備方法，包括如下步驟：培養干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030，得到胞外多糖。

所述方法中，采用MRS液體培養基培養干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)WXD030。

所述方法中，所述培養的溫度為37℃；所述培養的時間為30h；所述培養為靜置培養。

所述方法還包括如下步驟：(1)采用三氯乙酸萃取所述培養得到的發酵液，收集上清液；(2)用乙醇沉淀步驟(1)得到的上清液，收集沉淀；(3)將步驟(2)得到的沉淀溶解后進行透析，收集分子量為8K～12KDa的物質，冷凍干燥。