[發明專利]一種ZL006脂質體及其制備方法

有效

• 申請號: 201310473774.1
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103494773A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 徐群為;辛洪亮;吳琳;王中元;王寶彥;趙越;呂玲燕
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K31/606;A61K47/24;A61K47/28;A61P9/10
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 陳建和

技術領域

本發明涉及一種脂質體物質及其制備，尤其是新化合物ZL006的脂質體及其制備方法和應用。

背景技術

腦卒中是一種高致死、高致殘、高復發的神經系統疾病，臨床上80%以上的腦卒中屬于缺血性腦卒中。研究顯示：腦組織在缺血條件下，興奮性氨基酸（如谷氨酸）過度釋放，引起N-甲基-D天門冬氨酸受體（NMDAR）過度激活，導致通過NMDAR-PSD-95-nNOS途徑病理性一氧化氮（NO）釋放增多，提示缺血性腦卒中的產生可能與細胞漿內的nNOS和細胞膜上新PSD95結合增多有關。ZL006是一種小分子nNOS-PSD-95解偶聯劑，其化學名為4-（2-羥基-3,5-二氯芐胺基）-2-羥基苯甲酸。結構如下圖所示：

研究表明，ZL006能夠有效抑制nNOS從細胞漿到細胞膜的轉位，抑制NO的病理性釋放，對谷氨酸刺激下的神經細胞損傷顯示出明顯的神經保護作用，改善中腦動脈閉塞（MCAO）再灌注動物神經缺陷癥狀、縮小梗死容積。同時，ZL006避免了直接干預NMDAR、nNOS可能引起的學習記憶障礙、行為異常等副作用，具有很高的安全性。由于ZL006的親水性較強，透過血腦屏障能力有限，對其發揮治療作用有一定程度的限制。

脂質體作為類脂質雙分子層結構的納米遞藥系統，可將藥物ZL006包封于脂質雙分子層中，提高其透過血腦屏障的能力，增加其向靶組織分布的機會。目前脂質體的制備方法主要有薄膜分散法、逆向蒸發法、冷凍干燥法、注入法等。在選擇合適的方法將ZL006制成脂質體后，后期可以對其進行靶向修飾，以實現脂質體腦內雙級靶向遞送。

發明內容

本發明的目的是，提出一種ZL006脂質體及其制備方法。使ZL006脂質體透過血腦屏障的能力大大增強，充分發揮其治療作用。

本發明的技術方案是，ZL006脂質體，由脂質雙分子層和ZL006組成，脂質雙分子層的脂質材料和ZL006的重量比為10-4:1，優選6:1。

脂質雙分子層是指脂質聚集形成的形式，疏水性的脂肪鏈朝向外邊而親水性的極性基團朝向中間。

所述脂質材料為磷脂、膽固醇或鞘脂，是組成生物細胞膜的基本材料；包括大豆磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、大豆磷脂酰絲氨酸、大豆磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃磷脂、蛋黃磷脂酰甘油、蛋黃磷脂酰絲氨酸、蛋黃磷脂酰肌醇、腦磷脂、神經鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿等磷脂材料和膽固醇、牛膽酸鈉、膽固醇乙酰酯等材料中的一種或幾種的混合物，優選大豆磷脂和膽固醇。

選用磷脂、膽固醇混合的脂質材料更好，磷脂與膽固醇的重量比例為2-10:1。

所述脂質材料中大豆磷脂和膽固醇的重量比例為2:1、4:1、6:1、8:1、10:1，優選4:1。

本發明提供的ZL006脂質體可由注入法或薄膜分散法制備得到，優選注入法。

注入法包括下述步驟：（1）將ZL006、上述成分（包括重量比例）的脂質材料溶解于有機溶劑中，（渦旋）溶解并使之混合均勻，得到有機相，所述有機溶劑為無水乙醇或乙醚，優選無水乙醇；

（2）用微量注射器把有機相逐滴加入到不斷攪拌的水相中，所述條件為溫度50±10℃，攪拌速度150-750rpm，如150、350、550、750rpm，優選550rpm；

（3）減小粒徑后減壓（旋轉）蒸發除去有機溶劑，然后分別經0.45μm和0.22μm的微孔濾膜過濾，得到ZL006脂質體。

或采用薄膜分散法，包括下述步驟：（1）將ZL006、脂質材料溶解于有機溶劑中，渦旋溶解并使之混合均勻，所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、正己烷和乙腈等溶劑中的一種或幾種混合物，優選氯仿；

（2）減壓（旋轉）蒸發除去有機溶劑在瓶壁上形成薄膜；

（3）使薄膜徹底干燥，所述干燥方法為減壓真空干燥，溫度為40℃，真空度-0.1MPa；

（4）加入緩沖液，水浴超聲使得薄膜充分水化；

（5）減小粒徑，然后分別經0.45μm和0.22μm的微孔濾膜過濾，得到ZL006脂質體。

上述注入法或薄膜分散制備ZL006脂質體步驟中，注入法所述水相和薄膜分散法所述水化薄膜溶液的緩沖液為磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、醋酸和醋酸鈉中的一種或幾種混合物，優選醋酸鹽緩沖液。

所述緩沖液的pH為3.0-8.0，優選4.0，具體濃度是0.1mol/L。