[發明專利]一種細胞濃縮補料培養工藝

在審

• 申請號: 201811065813.3
• 申請日: 2018-09-12
• 公開（公告）號: CN109134645A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 肖尚;翁源燦;陳浩帆;葉慶妮
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12N5/20;C12N5/10
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 逯恒

本發明涉及細胞培養領域，具體而言，涉及一種細胞濃縮補料培養工藝，細胞培養過程進行補液和換液，其中，換液過程中，僅細胞被截留，目標產物隨液體排出。本發明的培養工藝，在換液時，只截留細胞，不截留細胞分泌的產物，目標產物隨著細胞培養上清一起排出反應器外，其與現有的濃縮補料培養工藝相比，對于自身穩定性較好的目標產物基本無差別，但對于自身穩定性較差的目標產物能夠大大提高其產量。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，具體而言，涉及一種細胞濃縮補料培 養工藝。

背景技術

單克隆抗體可用于疾病的診斷和治療，具有非常巨大的應用價 值。由于單克隆抗體分子量較大，需要復雜的翻譯后修飾。而微生 物細胞不能夠準確的進行翻譯后修飾，因此目前單克隆抗體的生產 主要依靠哺乳動物細胞表達。

目前業界用于哺乳動物細胞培養的方式主要分為四種：批次培 養(batch)、補料批次培養(fed-batch)、濃縮補料培養(concentration fed-batch)以及灌流培養(perfusion)。四種培養方式各有優勢和缺 點：

1)批次培養比較簡單，但抗體表達量較低，生產成本較高，不 適用于產業化生產。

2)補料批次培養是目前使用最普遍的生產方式，具有控制方便， 抗體表達量較高，生產成本適中的優勢。但對于一些表達量較低的 項目，該培養工藝的成本還是顯得較高。同時對于一些不穩定的抗 體或蛋白產品，該培養工藝就不再適用。

3)濃縮補料培養目前還沒有被廣泛使用，只有少數技術水平較 高的公司在使用，具有單位罐體積生產效率高，成本低的優勢。但 該工藝由于培養時間較長，抗體或蛋白一直被截留在反應器，所以 對一些不穩定的抗體或蛋白，該工藝就顯得不適用。

4)灌流培養最近開始被關注和使用，該工藝具有生產效率高， 生產成本低的優勢，特別是對于不穩定的抗體或蛋白，該培養工藝 具有非常大的優勢。但該工藝目前并沒有被廣泛使用，主要是由于 該工藝相比較前三個工藝顯得非常復雜，增加了生產的難度，在工 業生產中非常難以實施。同時由于該工藝是連續的收樣，也導致一 個完整的生產周期產生多批收獲抗體或蛋白，使得批間可能具有較 大差異。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

為解決以上主流細胞培養工藝存在的問題，本發明提供了一種 新的細胞培養工藝，該細胞培養工藝是在濃縮補料培養 (concentration fed-batch)的基礎上進行改進和創新，濃縮補料培養 是將細胞和目標產物都截留在反應器內，而本發明的培養工藝只將細胞截留在反應器中，目標產物隨著細胞培養上清一起排出反應器 外，其與現有的濃縮補料培養工藝相比，能夠提高抗體生產效率， 并且大大提高了不穩定抗體的穩定性生產。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種細胞濃縮補料培養工藝，細胞培養過程進行補液和換液， 其中，換液過程中，僅細胞被截留，目標產物隨液體排出。

本發明提供的細胞濃縮補料培養工藝，是在濃縮補料培養 (concentration fed-batch)的基礎上進行改進和創新，濃縮補料培養 是將細胞和目標產物都截留在反應器內，將不含有目標產物的細胞 培養上清排出反應器，以達到濃縮產品的目的，但這導致了目標產 物在反應器中存在較長時間，增加了目標產物相關的雜質，同時對 于一些不穩定的產品，該培養工藝就不再適用。

本發明的培養工藝，在換液時，只截留細胞，不截留細胞分泌 的產物，目標產物隨著細胞培養上清一起排出反應器外，其與現有 的濃縮補料培養工藝相比，對于自身穩定性較好的目標產物基本無 差別，但對于自身穩定性較差的目標產物能夠大大提高其產量。

進一步地，所述細胞培養過程進行補液和換液的步驟為：