[發(fā)明專利]基于金納米團(tuán)簇比率型熒光探針的硫酸酯酶測(cè)定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811064730.2
• 申請(qǐng)日: 2018-09-12
• 公開（公告）號(hào): CN108982462A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧豪華;黃開源;陳偉;林珍;洪國(guó)粦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是基于對(duì)硝基苯酚可選擇性猝滅脲酶-金納米團(tuán)簇中蛋白質(zhì)二酪氨酸的熒光而對(duì)金核本身熒光并不產(chǎn)生影響，而硫酸酯酶能催化對(duì)硝基苯硫酸分解生成對(duì)硝基苯酚，利用熒光光譜的特征變化，直接用于硫酸酯酶活性的測(cè)定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是所使用的脲酶-金納米團(tuán)簇采用脲酶直接還原氯金酸的方法制備：將濃度為5 mL濃度為1 moL/L的NaOH溶液與20 mL濃度為10 mmoL/L氯金酸依次加入到20 mL濃度為50 mg/mL新鮮配制的脲酶溶液中，混勻后置于37℃恒溫水浴槽中孵育8小時(shí)，待反應(yīng)結(jié)束后用分子量為7000的透析袋對(duì)反應(yīng)液透析純化48小時(shí)，得到脲酶-金納米團(tuán)簇?zé)晒獠牧纤芤海兓蟮碾迕?金納米團(tuán)簇溶液用50 mmoL/L、pH=7.40的Tris-HCl緩沖液稀釋4倍后置于冰箱4℃避光保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是利用脲酶-金納米團(tuán)簇在410 nm和630 nm處的熒光強(qiáng)度比值的變化值?（F₆₃₀/F₄₁₀）判斷硫酸酯酶的含量，所使用的激發(fā)波長(zhǎng)為340 nm。

4.一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，包括如下步驟： 將100 μL酶樣品溶液溶于50 mmol/L pH=7.4的Tris-HCl緩沖液中，然后加入到700μL含0.1 mmoL/L對(duì)硝基苯硫酸的濃度為50 mmol/L、pH=7.4的Tris-HCl緩沖液中，混合均勻，置于37℃水浴鍋中反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，立即加入200 μL脲酶-金納米團(tuán)簇溶液，以340 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定反應(yīng)液在350~650 nm的發(fā)射光譜，并計(jì)算體系在630 nm和410 nm處的熒光強(qiáng)度比值F₆₃₀/F₄₁₀，通過熒光強(qiáng)度比值變化值?（F₆₃₀/F₄₁₀）標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行硫酸酯酶的測(cè)定。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是硫酸酯酶測(cè)定的線性范圍為0.01~1 U/mL，最低檢測(cè)限為0.01 U/mL。

6.一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的人血清硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，包括如下步驟：將不同濃度的硫酸酯酶加入到人血清中，取10 μL血清樣品加入到790 μL含0.1 mmoL/L對(duì)硝基苯硫酸的濃度為50 mmol/L、pH=7.4的Tris-HCl緩沖液中，混合均勻，置于37℃水浴鍋中反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，立即加入200 μL脲酶-金納米團(tuán)簇溶液，以340 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定反應(yīng)液在350~650 nm的發(fā)射光譜，并計(jì)算體系在630 nm和410 nm處的熒光強(qiáng)度比值F₆₃₀/F₄₁₀，通過熒光強(qiáng)度比值的變化值?（F₆₃₀/F₄₁₀）標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，獲得人血清樣品中硫酸酯酶的含量。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的人血清硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是所使用的脲酶-金納米團(tuán)簇采用脲酶直接還原氯金酸的方法制備：將濃度為5 mL濃度為1 moL/L的NaOH溶液與20 mL濃度為10 mmoL/L氯金酸依次加入到20 mL濃度為50 mg/mL新鮮配制的脲酶溶液中，混勻后置于37℃恒溫水浴槽中孵育8小時(shí)，待反應(yīng)結(jié)束后用分子量為7000的透析袋對(duì)反應(yīng)液透析純化48小時(shí)，得到脲酶-金納米團(tuán)簇?zé)晒獠牧纤芤海兓蟮碾迕?金納米團(tuán)簇溶液置于冰箱4℃避光保存。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種脲酶-金納米團(tuán)簇作為比率型熒光探針的人血清硫酸酯酶活性的測(cè)定方法，其特征是測(cè)定的回收率為97.6%~105.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2~6.3%。