[發明專利]液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法

在審

• 申請號: 201811045710.0
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109001333A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 嚴忠雍;張小軍;陳思;方益
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于包括以下步驟：

a）提取：稱取1.00g的待測樣品，置于離心管A中，加入4mL有機提取劑，渦旋振蕩2分鐘，常溫超聲振蕩10分鐘，5000rpm轉速離心6分鐘，接著將上清液轉移至離心管B中，往離心管B中加入16mL水，超聲振蕩0.5分鐘，制得待凈化的混合液；

b）將待凈化的混合液加至已用10mL活化液活化的C₁₈固相萃取柱，上樣結束后，用5mL淋洗液淋洗處理，抽干柱內殘留液并棄用全部流出液，再用3mL洗脫液進行洗脫，用離心管C收集洗脫液，漩渦振蕩1分鐘，經有機相微孔濾膜過濾，制得待測液；

c）分析測定：在超高效液相色譜-串聯質譜的多反應監測模式下針對待測液中的3種短裸甲藻毒素進行定性定量分析。

2.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：

所述步驟c）分析測定中，

液相色譜測試條件如下：色譜柱為ACQUITYTM UPLC BEH C₁₈柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），進樣體積10 μL，樣品室溫度4℃，柱溫40 ℃，流速0.2 mL/min，流動相A為含有0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液，B為乙腈；梯度洗脫：0～0.5 min，50%流動相A；0.5～1.5 min，50%～35%流動相A；1.5～9.0 min，35%流動相A；9.0～10 min，35%～50%流動相A；10～11min，50%流動相A；

質譜檢測條件如下：電噴霧離子源，正離子掃描；檢測方式為多反應監測模式；毛細管電壓為3.0 kV；離子源溫度為150 ℃；脫溶劑氣溫度為450 ℃；錐孔氣流量為150 L/h；脫溶劑氣流量為600 L/h。

3.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述待測樣品為經粉碎充分勻質后的待測貝類樣品。

4.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述有機提取劑為丙酮、甲醇或乙腈中的一種。

5.根據權利要求1或4所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述的有機提取劑為丙酮。

6.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述離心管A為15mL的離心管，所述離心管B為50mL的離心管。

7.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述的活化液為20vol%的丙酮水溶液。

8.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述的淋洗液為20vol%的甲醇水溶液。

9.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述的洗脫液為乙腈。

10.根據權利要求1所述的一種液相色譜串聯質譜測定貝類中3種短裸甲藻毒素的方法，其特征在于：所述有機相微孔濾膜的孔徑為0.22μm。