[發明專利]一種線性pH梯度緩沖液及其應用

在審

• 申請號: 201811044022.2
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109096363A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 李國榮
• 申請（專利權）人: 蘇州美極醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 胡擁軍;糜婧

本發明公開了一種線性pH梯度緩沖液及其應用，線性pH梯度緩沖液包括第一緩沖液和第二緩沖液；第一緩沖液為pH≤3的緩沖液，其包括負一價的酸根離子；第二緩沖液為pH≥8的緩沖液，其包括負二價的酸根離子、負三價的酸根離子和正一價的陽離子；pH梯度緩沖液的應用為進行蛋白分離純化時，以第一緩沖液和第二緩沖液的混合液作為洗脫溶液；線性pH梯度緩沖液中的第一緩沖液和第二緩沖液混合時，可以得到pH呈線性梯度變化的緩沖液，并且該溶液含有的鹽遠遠少于鹽緩沖溶液，在生產應用的時候，可以省去除鹽的步驟，節約成本。

技術領域

本發明涉及一種線性pH梯度緩沖液及其應用，屬于緩沖試劑技術領域。

背景技術

生物制藥(包括以蛋白為基礎的治療藥物和單克隆抗體mAbs)下游的提純，例如蛋白的分離純化，目前普遍采用離子交換層析法(IEC)，以鹽緩沖溶液作為流動相來使藥用蛋白質從潛在的污染物中分離：根據蛋白質的電荷，選取親和填料(介質)，以鹽緩沖溶液作為流動相進行離子交換，這樣的下游層析方法是現在行業的主流工藝。但是，由于進行蛋白分離特別是單克隆抗體蛋白分離純化中，親和填料普遍使用美國General Electric公司生產的親和填料，親和填料純化原理主要是根據蛋白與配基之間的特異性結合的原理，將能與蛋白特異性結合的配基交聯到填料上，就可以純化特定的蛋白，親和填料由于選擇單一，因此成本較高。并且，普通的酸堿溶液混合為在弱酸性溶液中加入弱堿，p H值從5到8.5會發生跳變，只會得到一個S形曲線，如圖1所示。pH值的突然急劇上升，經常導致蛋白質和與之密切相關的電荷相近的雜質同時在IEC柱上洗脫出來，無法達到以分離為目的的生產和質量檢測。同時，采用鹽分離出的目標蛋白質需要除去大量的來自鹽緩沖溶液中的鹽成分，才能再進行下一道工序，浪費時間也增加生產成本。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于提供一種線性pH梯度緩沖液，第一緩沖液和第二緩沖液混合時，可以得到pH呈線性梯度變化的緩沖液，并且該溶液含有的鹽遠遠少于鹽緩沖溶液，在生產應用的時候，可以省去除鹽的步驟，節約成本。

本發明的第二個目的在于提供上述線性pH梯度緩沖液的應用，可應用于離子交換層析法中作為洗脫液。

實現本發明的第一個目的可以通過采取如下技術方案達到：一種線性pH梯度緩沖液，包括第一緩沖液和第二緩沖液；第一緩沖液為pH≤3的緩沖液，其包括負一價的酸根離子；第二緩沖液為pH≥8的緩沖液，其包括負二價的酸根離子、負三價的酸根離子和正一價的陽離子。

進一步地，負一價的酸根離子為H₂PO₄^-(磷酸二氫根離子)。

進一步地，負二價的酸根離子為HPO₄^2-(磷酸氫根離子)；負三價的酸根離子為C₅H₅O₅COO^3-(負三價檸檬酸根離子)；正一價陽離子為Na⁺。

進一步地，第一緩沖液包括磷酸和檸檬酸；磷酸和檸檬酸的摩爾之比為1:(0.5-3)。

進一步地，磷酸和檸檬酸的摩爾之比為1:(1-2)。

進一步地，第二緩沖液包括磷酸氫二鈉和檸檬酸三鈉；磷酸氫二鈉和檸檬酸三鈉的摩爾之比為4:(3-5)。

進一步地，磷酸氫二鈉和檸檬酸三鈉的摩爾之比為4:(3-4)。

進一步地，第一緩沖液包括磷酸二氫鈉和檸檬酸；磷酸二氫鈉和檸檬酸的摩爾之比為(1-3):2。

進一步地，磷酸二氫鈉和檸檬酸的摩爾之比為(1-2):2。

進一步地，第二緩沖液包括磷酸氫二鈉和檸檬酸三鈉；磷酸氫二鈉和檸檬酸三鈉的摩爾之比為(1-4):2。