[發明專利]一種用蝸牛酶制備殼寡糖的方法及其用途

有效

• 申請號: 201811039866.8
• 申請日: 2018-09-06
• 公開（公告）號: CN109136307B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 蘇政權;曹華
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12P19/14;A61K31/722;A23L33/125;A61P11/00
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 徐晶

本發明屬于低聚糖制備技術領域，具體涉及一種用蝸牛酶制備殼寡糖的方法及其應用。本發明提供的用蝸牛酶制備殼寡糖的方法，對蝸牛酶酶解殼聚糖的酶解時間、酶解溫度、底物濃度、酶底質量比等具體的工藝條件進行探索和優化，提高酶解效率，結合冷凍干燥法，保持了殼寡糖的性狀，便于產品的保存和進一步使用，為蝸牛酶制備殼寡糖的大生產提供依據。本發明制得的殼寡糖還可以顯著的改善特發性肺纖維化大鼠模型的纖維細胞活化，對特發性肺纖維化具有很好的改善作用，有利于特發性肺纖維化患者的康復。

技術領域

本發明屬于低聚糖制備技術領域，具體涉及一種用蝸牛酶制備殼寡糖的方法及其用途。

背景技術

殼聚糖又稱乙酰甲殼素，是甲殼素脫N-乙酰基的化合物，具有生物可降解性、安全性、良好的生物兼容性。但殼聚糖是長鏈大分子，生理條件下水溶性差，溶液黏度大，使其作為生物效應劑的應用受到很大限制。殼寡糖是其降解產物，指聚合度小于10的氨基葡萄糖的聚合物，相對分子質量小，水溶性好，易被分散和吸收，且具備許多與殼聚糖相似的生物學性質，特別是聚合度為5和6的殼寡糖，具有抗氧化、抗腫瘤、免疫增強、活化腸道菌等活性，在體內治療腫瘤時，不引起急性中毒以及體質量的迅速下降，毒副作用較小，適用于臨床治療，也可作為食品添加劑和保健品，在食品、醫藥及化妝品領域有著廣泛的應用。

目前利用殼聚糖制備殼寡糖的方法主要有3種：物理降解法、化學降解法和酶解法。物理降解法主要通過將殼聚糖分子內的化學鍵在輻射過程中發生斷裂而降解，如超聲波法、微波輻射法等，收率較低、生產成本相對較高，實現工業化難度較大。化學降解法主要包括酸解法、過氧化氫及過硼酸鈉氧化降解法等，如酸解法常用鹽酸降解殼聚糖，雖然適合工業化生產，但是根據EinbuAslak等人對于甲殼素在鹽酸中的解聚和乙酰化反應的研究發現酸解法所得產品單糖較多，殼寡糖含量低，生物活性難以體現，且制備過程中需要大量的化學試劑，會嚴重污染環境。

酶解法主要有專一性酶解和非專一性酶解，前者雖然對殼聚糖的降解專一性強，但目前獲得殼聚糖酶菌株的產酶能力較低，且來源有限。非專一性酶，如中國專利文獻201711093783.2公開的一種采用木瓜蛋白酶冷凍干燥制備殼寡糖的方法，能在短時間內迅速降低殼聚糖黏度，得到較多的殼寡糖，但是所得殼寡糖平均分子量過小，可能會對產品的生物活性有影響。可見單獨使用一種非專一性酶制備殼寡糖時，產品往往黏度較低，寡糖含量少，單糖多，產品質量不好，或者降解反應效率低，難以實際應用，更值得注意的是，專一性酶價格昂貴、難以商業化。

近年來，采用多種非專一性酶聯合降解殼聚糖制備殼寡糖成為研究熱點。如蛋白酶、纖維素酶等聯合應用，一方面能快速降低反應物殼聚糖的黏度，另一方面能獲得大量生物活性高的聚合度為3～7的殼寡糖，但該方法必須使用多種酶，各個酶之間的配比，相互協調作用不一，得到的殼寡糖分子量不一，雖用復合降解法可得到確定分子量的殼寡糖，但該方法繁瑣復雜，商業化生產應用受到限制，所得的殼寡糖的穩定性和質量也受限，降低了殼寡糖的生物活性和用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用蝸牛酶制備殼寡糖的方法，主要針對現有技術存在的問題：物理降解法成本較高且產率低，化學降解法步驟繁多，所得產品單糖較多、殼寡糖含量低且大量的化學試劑會污染環境，而使用常用的酶解法制備殼寡糖時，各個單酶的降解效率不高且某些專一性酶來源受限、價格昂貴，聯合應用幾種非專一性酶時又必須考慮相互作用降解問題，導致選用酶時受到限制。本發明提供的用蝸牛酶制備殼寡糖的方法簡便、快速，對環境污染小，所得殼寡糖性狀良好、分子量理想。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種用蝸牛酶制備殼寡糖的方法，包括以下步驟：

S1取殼聚糖原料干燥至恒重，溶解于乙酸-乙酸鈉緩沖液中，攪拌溶解，配制成質量濃度為1.0％的殼聚糖溶液；