[發明專利]一種TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法在審
| 申請號： | 201811035672.0 | 申請日： | 2018-09-06 |
| 公開（公告）號： | CN110878319A | 公開（公告）日： | 2020-03-13 |
| 發明（設計）人： | 聶麗;劉廣洛 | 申請（專利權）人： | 上海張江生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C07K14/705 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201203 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 tnf 相關 激活 誘導 細胞因子 制備 方法 | ||
1.一種TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于， 所述制備方法包括：1）基因合成，合成含有TNF相關激活誘導細胞因子基因及原核系統表達標簽的基因序列；2）基因轉化及誘導表達；3）含有原核系統表達標簽的融合蛋白質的純化；4）原核系統表達的表達標簽的去除；5）目標蛋白質TNF相關激活誘導細胞因子的純化。
2.根據權利要求1所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述原核表達系統的表達標簽為His或GST或TRX。
3.根據權利要求2所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述原核表達系統的表達標簽為GST。
4.根據權利要求1所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述的原核系統表達的表達標簽的去除，是經過含有表達標簽的融合蛋白質的自切而去除表達標簽。
5.根據權利要求4所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述的原核系統表達的表達標簽是GST標簽，GST標簽的去除是經過含有GST表達標簽的融合蛋白質的自切而去除。
6.根據權利要求5所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述融合蛋白質的自切條件為：緩沖液中增加1-10mmol/L的二價金屬離子，pH為7.5-8.5，在30℃條件下自切24至72小時。
7.根據權利要求6所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述融合蛋白質的自切過程中增加的二價金屬離子為Ca2+或Mg2+或Zn2+。
8.根據權利要求7所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述融合蛋白質的自切過程中增加的二價金屬離子為Ca2+。
9.根據權利要求8所述的TNF相關激活誘導細胞因子的制備方法，其特征在于，所述融合蛋白質的自切條件為：緩沖液中增加4mmol/L的Ca2+，pH為8.0，在30℃條件下自切72小時。
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