[發(fā)明專利]用于控制擬南芥葉片衰老的引物、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811005669.4
• 申請(qǐng)日: 2018-08-30
• 公開（公告）號(hào): CN108929917B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)隽?/a>;郭永峰;李偉;高曉明;徐萌萌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島清泰聯(lián)信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37256
• 代理人: 李祺;張潔

本發(fā)明公開了一種用于控制擬南芥葉片衰老的引物、試劑盒及其應(yīng)用，屬于植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，能夠解決在延緩許多作物衰老突變體中，作物農(nóng)藝性狀較差，很難被利用的問題。該技術(shù)方案包括根據(jù)小麥基因TaNACS設(shè)計(jì)特異性上下游引物，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老。本發(fā)明應(yīng)用小麥TaNACS基因可以控制擬南芥葉片衰老過程，同時(shí)該基因的過表達(dá)不影響擬南芥其它農(nóng)藝性狀。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于控制擬南芥葉片衰老的引物、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

衰老是植物發(fā)育的最后一個(gè)階段，其不僅受溫度、病害、脅迫等外因影響，同時(shí)還被基因調(diào)控，受體內(nèi)激素水平的影響。葉片衰老與作物產(chǎn)量及品質(zhì)息息相關(guān)，作物早衰或晚衰不利于完成其正常的生命周期，造成作物減產(chǎn)或者品質(zhì)降低，嚴(yán)重影響農(nóng)藝性狀。因此，葉片衰老調(diào)控因子的發(fā)現(xiàn)及其應(yīng)用是實(shí)現(xiàn)作物高產(chǎn)高品質(zhì)的有效途徑之一。

擬南芥作為植物科學(xué)，包括遺傳學(xué)和植物發(fā)育研究中的模式生物之一，對(duì)其衰老調(diào)控因子的研究有利于推進(jìn)植物衰老研究的進(jìn)程，進(jìn)而將其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)耕作，提高農(nóng)產(chǎn)物產(chǎn)量。然而，現(xiàn)有的許多作物中延緩衰老突變體研究中，多數(shù)農(nóng)藝性狀較差，很難被利用。因此，獲得特異調(diào)控?cái)M南芥葉片衰老但不影響其它農(nóng)藝性狀的基因是解決延緩衰老的關(guān)鍵策略之一。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明提出一種用于控制擬南芥葉片衰老的的引物、試劑盒及其應(yīng)用，其能夠特異調(diào)控?cái)M南芥葉片衰老，同時(shí)不影響其它農(nóng)藝性。

為解決所述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

根據(jù)小麥基因TaNACS設(shè)計(jì)特異性上下游引物，具體包括：

本發(fā)明還提出試劑盒，包含如上述技術(shù)方案所述的用于控制擬南芥葉片衰老的引物。

本發(fā)明還提出利用上述技術(shù)方案所述的引物控制擬南芥葉片衰老的方法，具體的，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老。

作為優(yōu)選，所述通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老，具體包括：

將以小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴(kuò)增得到的TaNACS基因產(chǎn)物通過重組連接到過表達(dá)載體上，形成TaNACS重組載體；

利用TaNACS重組載體為模板，以SEQ ID NO.3為上游引物、SEQ ID NO.4為下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過gateway方法連接到誘導(dǎo)表達(dá)載體中，獲得TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體，并將TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體整合到擬南芥基因組，篩選獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因材料；

利用TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體為模板，通過LR反應(yīng)形成35S驅(qū)動(dòng)的TaNACS基因組成型過表達(dá)載體，并將其整合到擬南芥基因組，篩選獲得組成型過表達(dá)材料。

作為優(yōu)選，所述通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老，還包括以下步驟：

以轉(zhuǎn)基因擬南芥cDNA為模板，以SEQ ID NO.5為上游引物、SEQ ID NO.6為下游引物，通過PCR及1.2％瓊脂糖顯色技術(shù)，對(duì)誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)基因材料或組成型過表達(dá)材料進(jìn)行表達(dá)鑒定。

作為優(yōu)選，所述以以小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴(kuò)增得到TaNACS基因產(chǎn)物的擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>