[發(fā)明專利]用于控制擬南芥葉片衰老的引物、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811005669.4
• 申請(qǐng)日: 2018-08-30
• 公開（公告）號(hào): CN108929917B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)隽?/a>;郭永峰;李偉;高曉明;徐萌萌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島清泰聯(lián)信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37256
• 代理人: 李祺;張潔

1.用于控制擬南芥葉片衰老的引物，其特征在于，根據(jù)小麥基因TaNACS設(shè)計(jì)特異性上下游引物，具體包括：

。

2.試劑盒，其特征在于，包含如權(quán)利要求1所述的用于控制擬南芥葉片衰老的引物。

3.利用權(quán)利要求1所述的引物控制擬南芥葉片衰老的方法，其特征在于，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老，具體包括：

將以中國(guó)春小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴(kuò)增得到的TaNACS基因產(chǎn)物通過重組連接到過表達(dá)載體上，形成TaNACS重組載體；

利用TaNACS重組載體為模板，以SEQ ID NO.3為上游引物、SEQ ID NO.4為下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過gateway方法連接到誘導(dǎo)表達(dá)載體中，獲得TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體，并將TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體整合到擬南芥基因組，篩選獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因材料；

利用TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體為模板，通過LR反應(yīng)形成35S驅(qū)動(dòng)的TaNACS基因組成型過表達(dá)載體，并將其整合到擬南芥基因組，篩選獲得組成型過表達(dá)材料。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將TaNACS基因整合到擬南芥基因組中，利用過量表達(dá)TaNACS基因促進(jìn)擬南芥葉片的衰老，還包括以下步驟：

以轉(zhuǎn)基因擬南芥cDNA為模板，以SEQ ID NO.5為上游引物、SEQ ID NO.6為下游引物，通過PCR及1.2%的瓊脂糖凝膠顯色技術(shù)，對(duì)誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)基因材料或組成型過表達(dá)材料進(jìn)行表達(dá)鑒定。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述以小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴(kuò)增得到TaNACS基因產(chǎn)物的擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>

95℃ 3 min；95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 1 min，33個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述利用TaNACS重組載體為模板，以SEQID NO.3為上游引物、SEQ ID NO.4為下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到TaNACS誘導(dǎo)表達(dá)載體的擴(kuò)增程序?yàn)?

95℃ 3 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。