[發(fā)明專利]一種人源胰島素生長因子-1（IGF-1）復合物的制備工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810972019.0
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN108998463A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設計）人: 關艷艷;杜雨威;黨平
• 申請（專利權）人: 蘇州紅冠莊國藥股份有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K19/00
• 代理公司: 蘇州市指南針專利代理事務所(特殊普通合伙) 32268
• 代理人: 王友生

本發(fā)明提供了一種人源胰島素生長因子?1(IGF?1)復合物的制備工藝，其工藝流程如下：步驟一，制備基因工程菌；步驟二，挑取單菌落基因工程菌進行放大培養(yǎng)并進行誘導表達目的蛋白；步驟三，收集菌體進行細胞破碎；步驟四，目的融合蛋白純化；步驟五，融合蛋白在羥胺溶液中裂解，得到胰島素生長因子?1(IGF?1)與胰島素生長因子結合蛋白?3(IGFBP?3)的復合物；步驟六，脫鹽后進行冷凍干燥。本發(fā)明提供的一種人源胰島素生長因子?1(IGF?1)復合物的制備工藝，通過在特定的溫度將基因工程菌培養(yǎng)的蛋白在羥胺溶液中進行裂解反應，得到復合物，使得生產(chǎn)過程可以得到有效控制，生產(chǎn)流程相對簡單，縮短時間。

技術領域

本發(fā)明涉及一種人源胰島素生長因子-1(IGF-1)復合物的制備工藝。

背景技術

胰島素生長因子-1(簡稱IGF-1)是一類既有促進細胞分化和增殖又具有胰島素作用的多肽物質，是人體本身含有的一種活性蛋白多肽物質，在降血糖、降血脂、舒張血管、促生長、促細胞分化、創(chuàng)傷修復、抗腫瘤、心血管疾病和抗衰老等方面都有重要的作用。

因此，胰島素生長因子-1(IGF-1)與胰島素生長因子結合蛋白-3(IGFBP-3)的復合物在醫(yī)藥領域被廣泛使用，但是復合物的生產(chǎn)始終是廠家需要解決的難題，需要推進實現(xiàn)流水線加工，因此其制備工藝顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題在于：提供一種人源胰島素生長因子-1(IGF-1)復合物的制備工藝，通過基因工程菌發(fā)酵方法進行制備，利用工程菌進行放大培養(yǎng)和細胞破碎，實現(xiàn)產(chǎn)品的規(guī)模生產(chǎn)。

為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案是：

一種人源胰島素生長因子-1(IGF-1)復合物的制備工藝，其工藝流程如下：

步驟一，制備基因工程菌；

步驟二，挑取單菌落基因工程菌進行放大培養(yǎng)并進行誘導表達目的蛋白；

步驟三，收集菌體進行細胞破碎；

步驟四，目的融合蛋白純化；

步驟五，融合蛋白在羥胺溶液中裂解，得到胰島素生長因子-1(IGF-1)與胰島素生長因子結合蛋白-3(IGFBP-3)的復合物；

步驟六，脫鹽后進行冷凍干燥。

進一步的，所述的基因工程菌為DH5α及其替代品。

進一步的，所述的基因工程菌設置在基因工程承載體上，所述的基因承載體為商品化的pET32α(+)及其替代品。

進一步的，所述的胰島素生長因子-1(IGF-1)與胰島素生長因子結合蛋白-3(IGFBP-3)的復合物結構為兩個蛋白之間引入一個二肽鍵，兩個蛋白分別為胰島素生長因子-1(IGF-1)和胰島素生長因子結合蛋白-3(IGFBP-3)。

進一步的，在步驟五中，所述的羥胺濃度為3M，PH為9.0，裂解溫度為40℃，反應時間為8h。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的一種人源胰島素生長因子-1(IGF-1)復合物的制備工藝，通過在特定的溫度將基因工程菌培養(yǎng)的蛋白在羥胺溶液中進行裂解反應，得到復合物，使得生產(chǎn)過程可以得到有效控制，生產(chǎn)流程相對簡單，縮短時間。

具體實施方式

一種人源胰島素生長因子-1(IGF-1)復合物的制備工藝，其工藝流程如下：

步驟一，制備基因工程菌；

步驟二，挑取單菌落基因工程菌進行放大培養(yǎng)并進行誘導表達目的蛋白；

步驟三，收集菌體進行細胞破碎；

步驟四，目的融合蛋白純化；