[發明專利]用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體及其應用

有效

• 申請號: 201810968449.5
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109136252B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 姚斌;蘇小運;李夢珠;羅會穎;黃火清;王亞茹;柏映國;涂濤;王苑;孟昆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N1/15;C12R1/885
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體及其應用。本發明構建含有barA1基因和/或barA2基因的重組表達載體，并用其轉化里氏木霉，得到菌性形態改變的重組里氏木霉，進而提高了里氏木霉的蛋白表達量和纖維素酶酶活。

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體及其應用。

背景技術

絲狀真菌具有菌絲極性生長的獨有特性，其能產生一種熱穩定性抗真菌因子類化合物，該類化合物能夠調節菌絲端點處隔膜和甲酸精定位，進而影響菌絲極性的生長。里氏木霉(Trichoderma reesei)是當今生產纖維素酶的主要工業絲狀真菌，其纖維素酶產量高、穩定性好、易于分離純化。里氏木霉不但具有菌絲極性生長的絲狀真菌特性，而且里氏木霉也具有好氧真菌的特性，其產酶過程和線粒體的呼吸代謝緊密相關。在液體發酵過程中，一方面里氏木霉需要充足的氧氣來維持細胞的生長、代謝和產酶，另一方面極性生長、粘度高的菌絲則嚴重阻礙攪拌和氧氣傳遞，導致細胞生長代謝活動減慢，生長發育遲緩甚至凋亡。

因此，現有的里氏木霉的菌絲形態導致發酵過程中溶氧及氧氣傳遞能力較低，進而影響其蛋白生產能力，使其不能滿足工業上的需求。

發明內容

為了解決現有的里氏木霉溶氧能力差、蛋白產量不能滿足工業需要的問題，本發明提供一種用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體。

本發明的目的在于提供用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體。

本發明的再一目的在于提供含有上述載體的重組里氏木霉。

本發明的再一目的在于提供含有上述載體的重組里氏木霉的制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述重組表達載體的應用。

本發明提供了用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體，所述重組表達載體中包括barA1基因和/或barA2基因。

根據本發明的具體實施方式，用于改變里氏木霉菌絲形態的重組表達載體的基因表達盒中由上游到下游依次包括表達原件：pdc1啟動子、barA1基因和/或barA2基因、eno1啟動子，其中，所述barA1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述barA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

barA1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

ACTGACACCACTGGCGGAAGCCTGCTTCTTAAGCCCGTTGCGTCGCTCCCAGCTCTTGAGGTCCAGCTCTTCCACGCCCACCTCCTGCTCCAGCGGCTGCACCTCTTCGTAGATGAGCTCCTCCTCGTCCTCTCCCTCCTCACCCTCGTCATCGCTTCGGGTATCCTCTGCGCCGTCTCCGCGGAGAACCTTGATGGCAACGCGGACGATCATGCAGAACCAGAAAATCGTAATGCCCTGCAGCAGGAGGAGGGGCGTGAGGAAAGCCCACTTGACCGTCTCGTTGTAGCACACGCGACCCGTCGAGTTGAAGAAGGGCTCAATCAGGTACGTGAAGCCCGAGGGGGCTTCAAAGGGGCCCTGCAGCGACGAATTCGGTCCGGCGAAGCATCCGTTGGGCATGATCTCGGGGGTGTGGGCGTAGATGGACCAGCAGACGGCCAGGTAGAAGACGTGACGCGCGATGAACCAGGTCACCATGAAGAGGCCAAAGGTCACGTCGCACAGCGTGGAGAAGCCGC

barA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示: